Fracionamento da peçonha da serpente Bothrops moojeni (Caiçara): caracterização parcial de frações proteolíticas e purificação de uma miotoxina (BmTx)

dc.contributorOliveira, Fábio de
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9653360085091331
dc.contributorLacerda, Rogério de Freitas
dc.contributorIzidoro, Luiz Fernando Moreira
dc.creatorVieira, Lara França
dc.date2019-05-10T16:10:24Z
dc.date2019-05-10T16:10:24Z
dc.date2006-09-09
dc.date.accessioned2023-09-28T20:14:42Z
dc.date.available2023-09-28T20:14:42Z
dc.identifierVIEIRA, Lara França. Fracionamento da peçonha da serpente Bothrops moojeni (Caiçara): caracterização parcial de frações proteolíticas e purificação de uma miotoxina (BmTx). 32 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006.
dc.identifierhttps://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25115
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9045971
dc.descriptionTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)
dc.descriptionAs peçonhas das serpentes botrópicas são ricas em enzimas proteolíticas associadas com atividades biológicas específicas, como atividades hemorrágica, miotóxica, coagulante e anticoagulante (fibrinogenolítica e fibrinolítica). O presente trabalho descreve o fracionamento da peçonha bruta de Bothrops moojeni e a caracterização de suas frações isoladas quanto ao perfil eletroforético, quanto a ativdade proteolítica sobre o fibrinogênio bovino e sobre a azocaseína e atividade miotóxica. A peçonha bruta foi submetida a uma cromatografia de troca iônica (DEAE Sephacel), equilibrada com tampão bicarnobato de amônio (AMBIC) 0,05-0,3 M). Esta cromatografia resultou em cinco frações principais denominadas E1 a E5. A fração E1 foi refracionada em resina de exclusão molecular (Sephadex G-75) e resultou em cinco subfrações deniminadas de E1G1 a E1G5. A fração E1G4 foi aplicada a uma resina de afinidade Heparina Agarose, e a proteína purificada neste passo, foi submetida a uma nova filtração em resina Sephadex G-25 para a retirada do sal. Todas as frações foram testadas quanto à atividade proteolítica sobre o fibrinogênio bovino e sobre a azocaseína. Na atividade sobre o fibrinogênio, cerca de 5 μg de cada fração foram inocubadas por 60 minutos a 37°C, com 50 μg de uma solução de fribrinogênio (1,5 mg/ 1mL na salina). A atividade proteolítica foi analisada em gel de poliacrilamida SD-PAGE 14%. Na atividade sobre a azocaseína, cerca de 50 μg de cada fração foram incubadas por 60 minutos a 37°C, com uma solução de azocaseína diluída em tampão Tris-HCl 50mM pH=7 e CaCl2 0,004 M (1 mg/ 1mL). As absorbâncias de cada fração foram lidas a 366 nm. Um aumento de 0,01 na absorbância corresponde a um aumento de uma unidade de atividade sobre a azocaseína. Os resultados mostraram que todas as frações e subfrações foram capazes de degradar o fibrinogênio bovino, em maior ou menor intensidade, degradando as cadeias a-α e B-β. Curiosamente, a fração E1 foi capaz de degradar a cadeia γ do fibrinogênio, fato incomum na literatura. Todas as frações s subfrações também foram capazes de degradar a azocaseína. uma proteína foi isolada da fração E1G1 após cromatografia em Heparina Agarose. Esta proteína mostrou uma alta atividade necrosante sobre o músculo gastrocnemius de camundongo. Observando o corte histológico através de microscopia ótica, podemos notar a presença de hemorragia, degeneração hialina, necrose celular e infiltrado leucocitário. Os resultados deste estudo mostraram que a peçonha da serpente Bothrops moojeni é muito rica em proteases capazes de degradar o fibrinogênio bovino e a azocaseína. Uma proteína miotóxica foi isolada e caracterizada parcialmente.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal de Uberlândia
dc.publisherBrasil
dc.publisherCiências Biológicas
dc.rightsAcesso Aberto
dc.subjectBothrops moojeni
dc.subjectProteases
dc.subjectMiotoxina
dc.subjectCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
dc.titleFracionamento da peçonha da serpente Bothrops moojeni (Caiçara): caracterização parcial de frações proteolíticas e purificação de uma miotoxina (BmTx)
dc.typeTrabalho de Conclusão de Curso


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