dissertação
Etossulfato de fenazina na maturação in vitro de oócitos bovinos
Fenazine etossulfate in in vitro maturation of bovine oocytes
Registro en:
CORREIA, P. A. Etossulfato de fenazina na maturação in vitro de oócitos bovinos. 2019. 82 p. Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2019.
Autor
Correia, Pâmella Alves
Institución
Resumen
The objective was to evaluate different doses of phenazine ethosulfate (PES) during in
vitro maturation of bovine oocytes and their consequences until thawing in vitrified
embryos. The concentrations 0; 0.16; 0.4 and 1.0 µM were evaluated on embryo
production, hatching and expansion rates, lipid content and morphological characteristics.
Refrigerator oocytes (n = 2,232) were matured for 24 hours, part was subjected to
fluorescence analysis, the others were cultured to D7, of which the grade I embryos were
vitrified, then heated and cultured for 48 hours. A minimum of 550 CCOs per treatment
were matured in 13 replicates resulting in 400 vitrified embryos. Data were analyzed by
SAS® statistical package. The rate of embryos produced for the Control (C = 41.5 ± 1.8,
n = 237) was higher (P <0.01) compared to PES0.16 (32.5 ± 1.7, n = 182). ) and PES1
(32.6 ± 1.7, n = 186), but did not differ from PES0.4 (35.6 ± 1.7% n = 210). The treated
groups did not differ from each other. The hatching rate (P = 0.10) tended to be higher
for PES1 (34.3 ± 5.6, n = 32) and PES0.4 (32.4 ± 5.6, n = 38) in Control (27.2 ± 5.7, n =
13) and PES0.16 (22.4 ± 5.8, n = 17). The expansion rate after 48 hours of cultivation
was the same (P <0.05) for the Control (27.1 ± 5.2, n = 20), PES0.16 (24.3 ± 5.6, n = 20)
and PES1 (10.3 ± 2.0, n = 12). The groups PES0,4 (17,7 ± 3,5, n = 10) and PES1 did not
differ from each other. Higher proportion of PES1 oocytes (P <0.01) reached advanced
meiosis stages (> 90%) than Control (50%). There was no treatment effect on the amount
of apoptotic cells or MCI. In D9 there was an increase in apoptotic cells (P <0.01) and a
reduction in the number of total cells (P <0.01) and MCI (P <0.01) in blastocysts. Lipid
concentration (triglycerides, phospholipids and cholesterol) in oocytes was lower (P
<0.01) in treated groups compared to Control. PES1 and PES0.4 triglycerides did not
differ from Control during cultivation; in PES0.16 were higher (P = 0.01) than Control.
The phospholipid and cholesterol concentrations of PES0.4 and PES0.16 were higher (P
<0.01) than in Control and PES1. Blastocysts that survived and hatched 48 hours after
thawing were 77% of PES0.4, 72% of PES1, versus 44% of PES0.16 and 25% of Control
indicating a positive treatment effect. Lipid concentration was decreased by PES in
oocytes, but apparently there was a compensatory effect in the culture phase, so PES used
only during IVM may lead to lipid increase in embryos. Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) O objetivo foi avaliar diferentes doses do etossulfato de fenazina (PES) durante a
maturação in vitro de oócitos bovinos e suas consequências até o descongelamento nos
embriões vitrificados. As concentrações 0; 0,16; 0,4 e 1,0 µM foram avaliadas sobre as
taxas de produção de embriões, de eclosão e de expansão, conteúdo lipídico e
características morfológicas. Oócitos de frigorífico (n=2.232) foram maturados durante
24 horas, parte foi submetido a análise de fluorescência, os demais foram cultivados até
D7, destes os embriões grau I foram vitrificados, posteriormente aquecidos e cultivados
por 48 horas. Um mínimo de 550 CCOs por tratamento foram maturados em 13 réplicas
resultando em 400 embriões vitrificados. Os dados foram analisados pelo pacote
estatístico SAS®. A taxa de embriões produzidos para o Controle (C=41,5 ± 1,8, n=237)
foi maior (P <0,01) em relação ao PES0,16 (32,5 ±1,7, n=182) e PES1 (32,6 ±1,7, n=186),
mas não diferiu do PES0,4 (35,6 ±1,7% n=210). Os grupos tratados não diferiram entre
si. A taxa de eclosão (P =0,10) tendeu a ser maior para o PES1 (34,3 ±5,6, n=32) e o
PES0,4 (32,4 ±5,6, n=38) em relação ao Controle (27,2 ± 5,7, n=13) e PES0,16 (22,4
±5,8, n=17). A taxa de expansão ao fim de 48 horas de cultivo foi igual (P <0,05) para o
Controle (27,1± 5,2, n=20), PES0,16 (24,3 ± 5,6, n=20) e PES1 (10,3 ± 2,0, n=12). Sendo
que os grupos PES0,4 (17,7 ± 3,5, n=10) e PES1 não diferiram entre si. Maior proporção
de oócitos do PES1 (P <0,01) atingiram estágios avançados de meiose (>90%) do que o
Controle (50%). Não houve efeito de tratamento sobre a quantidade de células apoptóticas
ou da MCI. No D9 houve aumento de células apoptóticas (P <0,01) e redução do número
de células totais (P <0,01) e da MCI (P <0,01) nos blastocistos. A concentração de lipídios
(triglicerídeos, fosfolipídios e colesterol) nos oócitos foi menor (P <0,01) nos grupos
tratados em relação ao Controle. Os triglicerídeos do PES1 e PES0,4 não diferiram do
Controle durante o cultivo; no PES0,16 foram maiores (P=0,01) do que o Controle. As
concentrações de fosfolipídios e colesterol do PES0,4 e PES0,16 foram maiores (P <0,01)
do que no Controle e PES1. Os blastocistos que sobreviveram e eclodiram após 48 horas
do descongelamento foram 77% do PES0,4, 72% do PES1, contra 44% para o PES0,16 e
25% para o Controle indicando que houve efeito positivo do tratamento. A concentração
de lipídeos foi diminuída pelo PES nos oócitos, mas aparentemente houve um efeito
compensatório na fase de cultivo, portanto o PES usado somente durante a MIV pode
levar a aumento de lipídeos nos embriões.