In a survey in Lavras, Minas Gerais state, Brazil, two populations of the genus Heterorhabditis were obtained from soil by the insect baiting technique. Light and scanning electron microscopy and DNA characterization were used for identification. Both populations can invade and develop in Galleria mellonella larvae and are morphologically similar to H. indica, H. baujardi, H. amazonensis and H. mexicana. Observation of scanning electron photographs indicates that morphometrics of both populations are similar to that in H. amazonensis. Similarities were found in the molecular sequence of the LSU D2D3 region. Morphological and molecular studies of the two populations showed that these nematodes are isolates of H. amazonensis.Em um levantamento realizado em Lavras, Minas Gerais, Brasil, duas populações do gênero Heterorhabditis foram obtidas do solo através da técnica de inseto-isca. Microscópio óptico de luz e eletrônico de varredura e caracterização molecular foram usados para a identificação. Ambas as populações mostraram-se patogênicas a larvas de Galleria mellonella e foram caracterizadas como morfologicamente similares a H. indica, H. baujardi, H. amazonensis and H. mexicana, podendo ser diferenciadas dessas espécies por características do juvenil infectivo, macho e fêmea. Foram observadas nas fotos de microscopia eletrônica estruturas padrão para as duas populações semelhantes às encontradas em H. amazonensis, e também os dados moleculares mostraram a mesma composição de nucleotídeos. Estudos morfológicos e moleculares dessas populações mostraram que os nematóides são a mesma espécie que H. amazonensis.