Arquivo retido, a pedido da autora, até maio 2020.Staphylococcus aureus can present many mechanisms in order to remain in mammary gland. The present study aimed to evaluate virulence factors and genetic mechanisms of drug resistance in 400 S. aureus strains isolated from bovine mastitis in Brazil, as well as to assess the association between these characteristics, year of isolation and geographic origin of the strains. Singleplex and multiplex PCR was used to identify virulence factors and drug resistance encoding genes. Detection of biofilm-forming was carried out using Congo red Tryptic Soy Broth assay. As a result, 83.5% isolates were biofilm-forming and 98.5% strains exhibited the biofilm gene icaAD. Virulence genes luk (Panton–Valentine Leukocidin), seb (Staphylococcal Enterotoxin B), sec (Staphylococcal Enterotoxin C), sed (Staphylococcal Enterotoxin D), tst (Toxic shock syndrome toxin 1) were observed in 3.5%, 0.5%, 1%, 0.25% and 0.74% of the strains, respectively. Hemolysin genes were observed in 82.85% (hla + hlb + ), 16.5% (hla + ) and 0.75% (hlb + ) isolates. The gene blaZ, associated with penicillin resistance, was detected in 82.03% isolates, whereas tetracycline resistance gene tetK and aminoglycoside gene aac(6’)-Ie–aph(2’)-Ia were observed in 33.87% and 45.15%, respectively. Fluoroquinolone resistance gene mepA was detected for the first time in all fluoroquinolone resistance S. aureus isolates. Resistance genes tetM (3.22%), tetL (1.61%), ermA (14.29%), ermB (14.29%), ermC (33.3%), ermT (9.52%), ermY (4.76%), msrA (9.52%) and mphC (9.52%) were detected in low frequency among the isolates. Our results showed a high frequency of S. aureus carrying mainly biofilm and hemolysin genes. Moreover, a wide variety of antimicrobial resistance genes that confers resistance to all classes of antimicrobial agents used in animals and human population were observed. These results highlight the pathogenic potential of S. aureus from cattle to cause severe disease in both humans and animals.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Staphylococcus aureus pode expressar diferentes fatores de virulência e resistência a vários agentes antimicrobianos em casos de mastite bovina. O presente estudo teve como objetivo avaliar os fatores de virulência e os mecanismos genéticos de resistência à drogas em 400 isolados de S. aureus de mastite bovina no Brasil, bem como verificar a associação entre essas características, ano de isolamento e origem geográfico. A identificação dos genes de virulência e resistência foi realizada por PCR singleplex e multiplex. A identificação fenotípica de formação de exopolissacarídeos (biofilme) foi realizado no caldo Triptona de Soja com Vermelho Congo e sacarose e incubados a 37 °C por 48 horas. Como resultado, 83,5% dos isolados foram produtores de biofilme. Os genes de resistência icaAD foram detectados em 98,5% isolados. Os genes luk (leucocidina Panton-Valentine), seb (enterotoxina estafilocócica B), sec (enterotoxina estafilocócica C), sed (enterotoxina estafilocócica D), tst (toxina 1 da síndrome do choque tóxico) foram observados em 3,5%, 0,5%, 1%, 0,25% e 0,74% dos isolados, respectivamente. Os genes das hemolisinas foram observados em 82,85% (hla + hlb +), 16,5% (hla +), 0,75% (hlb +). O gene blaZ, associado à resistência à penicilina, foi detectado em 82,03% dos isolados, enquanto os genes tetK de resistência à tetraciclina e aac(6’) -Ie–aph(2’)-Ia de resistência à aminoglicosídeos foi exibido em 33,87% e 45.15% dos isolados, respectivamente. O gene mepA associado a resistência a fluoroquinolonas foi detectado pela primeira vez em todos os isolados. Os genes de resistência identificados com menor frequência foram tetM (3,22%), tetL (1,61%), ermA (14,29%), ermB (14,29%), ermC (33,3%), ermT (9,52%), ermY (4,76%), msrA (9,52). %), mphC (9,52%). Concluí-se que houve uma alta frequência de S. aureus carregando genes de virulência para biofilme e hemolisina. Além disso, foi encontrada uma grande variedade de genes de resistência que conferem resistência a todas as classes de antimicrobianos utilizados em animais e população humana. Esses resultados mostram o potencial patogênico de S. aureus isolados de mastite bovina para causar doenças tanto em humanos quanto em animais.