Dissertação
Análise taxonômica e molecular de Cestoda nematotaeniidae parasito de intestino delgado de Rhinella marina (Linnaeus, 1758) (Amphibia: Bufonidae) de Belém-Pa
Registro en:
MELO, Francisco Tiago de Vasconcelos. Análise taxonômica e molecular de Cestoda nematotaeniidae parasito de intestino delgado de Rhinella marina (Linnaeus, 1758) (Amphibia: Bufonidae) de Belém-Pa. 2010. 112 f. Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Pará, Instituto de Ciências Biológicas, Belém, 2010. Programa de Pós-Graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários.
Autor
MELO, Francisco Tiago de Vasconcelos
Institución
Resumen
The amphibians of the species Rhinella marina known also as Giant Toad and have
cosmopolitan distribution. Posses nocturnes habits, due of variety of feeding they can live in
different habitats. Then, they can have many kinds of helminthes parasites. Among the
helminthes, the cestodas are the target of study of this work. The members of
Nematotaeniidae Family are commonly found in small intestine of repitilian and amphibians.
The frequent auto-infestation would justify the high taxes of parasitism in one host. The
present study has the objective to identify and to characterize the Cestoda of Rhinella marina
from Belém-PA. Twenty hosts were captured in homes of the metropolitan area of Belém-PA
and, after necropsy the Cestoda were isolated of intestine, and some specimens were fixed in
A.F.A (Glacial Acid Acetic 2%, Formaldehyde 3% and 95 % of Etanol 70º GL), and some
worms fixed in 2% Glutaraldehyde in Cacodilate buffer 0,1m P.h 7,4, to process in different
techniques. One part of the samples was dehydrated in Etanol Series, and stained with
Carmim®, and clarified with Metil Salicilate®. Some specimens were dehydrated and included
in Paraffin for acomplishement of longitudinal and tranverse cuts. The worms fixed in
Glutaraldehyde were dehydrated and included in Historesin®. Some Cestoda were processed
for Scanning Electron Microscopy (SEM). An indentification was accomplished throught
drawings in Olympus BX 41 microscope equipped with camera lucida, pictures were taken in
a MEDILUX microscope, with image captures system and in MEV JEOL 5310. Histological
sections were photographed and 3D reconstruction was made in RECONSTRUCTTM
software. The cestoid possess a cylindrical body, filiform and with difficult segmentation,
except in the final portion of the strobila. Escolex with four suckers without hooks or apical
organ, the pregnant proglotis presents two piriform capsules, funded in the basis and
containing one or more eggs. The observations in SEM and light microscopy of the cestoda
founded in small intestine of R.marina from Belém-PA, we observed that these Cestoda
belong to Nematotaeniidae Family, meanwhile the other morphologic characters observed did
not permit us to classify this helminth in any Gender of this Family. PROCAD - Programa Nacional de Cooperação Acadêmica CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Os anfíbios da espécie Rhinella marina também conhecidos como Sapo-Cururu e possuem distribuição mundial. Possuem hábitos noturnos, e devido a sua alimentação bem
diversificada vivem em diferentes habitats. Assim podem estar parasitados com uma
variedade de helmintos. Dentre os helmintos, os cestodas são o objeto de estudo deste
trabalho. Os membros da Família Nematotaennidae são comumente encontrados parasitando o
intestino delgado de anfíbios e répteis. O presente trabalho tem como objetivo identificar e
caracterizar morfologicamente e molecularmente um cestoda parasito de R. marina da cidade
de Belém-PA. Para isso vinte hospedeiros foram capturados em domicílios da região
metropolitana de Belém-PA e, após necropsia, os cestoda foram retirados do intestino
delgado, alguns exemplares foram fixados em A.F.A, alguns fixados em Glutaraldeído a 2%
em tampão cacodilato, e outros em álcool absoluto para serem processados para diferentes
técnicas. Parte da amostra foi desidratada em uma série etanólica, corados com Carmin®,
clarificados com Salicilato de Metila®. Alguns exemplares foram desidratados e incluídos em
parafina para realização de cortes transversais e longitudinais. Os exemplares fixados em
glutaraldeído foram desidratados e incluídos em Historesina®. Os cestoda também foram
processados para microscopia Eletrônica de Varredura. A identificação foi realizada por meio
de desenhos realizados no microscópio Olympus BX 41 com câmara clara, fotografias feitas
em microscópio MEDILUX, com sistema de captura de imagem e MEV. Os Cortes
histológicos longitudinais foram fotografados e com o Software RECONSTRUCTTM foi
realizada a reconstrução tridimensional do corpo do parasito. Helmintos fixados em álcool
absoluto foram submetidos a extração de DNA, amplificação gênica pela técnica de PCR e
seqüenciamento de nucleotídeos. Os cestoda possuem um corpo cilíndrico, filiforme e
indistintamente segmentado, exceto na porção posterior. Escólice com quatro ventosas sem
rostéolo ou órgão apical, os proglotes grávidos apresentam duas cápsulas piriformes, que se
fundem na base, contendo os ovos. A partir das observações por microscopia eletrônica e luz
dos cestoda encontrados no intestino delgado de R. marina, observou-se que estes cestoda
pertencem à Família Nematotaeniidae, no entanto os outros caracteres morfológicos e
moleculares por nós encontrados não encaixam este cestóide em nenhum gênero desta Família.