Dissertação
O tratamento com meio condicionado em cultura primária de tenócitos acelera o reparo tendíneo em modelo de lesão total do tendão calcâneo
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Autor
MACIEL, Analú Alves
Institución
Resumen
Conventional treatments for tendinopathies are ineffective and most clinical interventions do not provide adequate recovery leaving this tissues more likely to suffer reinjures. Recently, cell based therapies has been shown to be effective for the treatment in connective tissue injuries, such as tendons. Our aim is to evaluate if local treatment with tenocytes conditioned medium promoves tissue and functional improvements in the calcaneal tendon of tenotomized mice. The calcaneal tendon cells of Swiss mice were cultured for conditioning culture medium that will be used as a treatment. The animals were subjected to right calcaneal tenotomy and treated with saline solution (SAL), DMEM without serum (DMEM) and DMEM conditioned in primary tenocyte culture (MC) and compared to the control group (CTRL). Tendon functionality was measured using the Achilles Functional Index (AFI) and mechanical sensitivity through the paw withdrawal threshold (PWT) using the Von Frey test. All analyzes were performed at 7, 14 and 21 days post-injury (dpi). For histological analysis, tissues were stained with HE. Statistics were performed by ANOVA-2 followed by Tukey's post test, p<0.01. The MC group showed functional improvement at 7° and 14°dpi (-40.4±12.6; -36.6±10.4) compared to the DMEM groups (-76.5±11.7; -71, 6±7.9, p<0.01) and SAL (-88.8±15; -71.4±12.6 p<0.01). The MC group showed improvement in the paw withdrawal threshold at 7° and 14°dpl (2.24±1.15; 2.66±1.06) compared to the DMEM groups (0.15±0.07; 0 .45±0.76 p<0.01) SAL (0.13±1.15; 0.77±0.95 p<0.01). In the histological analysis, the MC group showed better tissue organization with cells presenting a format more similar to the control group, while the SAL and DMEM groups were more different from this one. We conclude that treatment with tenocytes conditioned medium accelerates tendon recovery, promoving improvement in mechanical sensitivity, functionality and tissue organization in the proposed injury model. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas Os tratamentos convencionais para as tendinopatias são pouco eficazes e as intervenções clinicas atuais não proporcionam melhora adequada, deixando este tecido suscetível a novas lesões. Recentemente, o uso de terapias mediadas por células tem-se mostrado eficaz para o tratamento de lesões em tecidos conectivos como os tendões. Nosso objetivo é avaliar se o tratamento local com meio condicionado em culturas de tenócitos é capaz de promover melhoras teciduais e funcionais no tendão calcâneo de camundongos tenotomizados. As células do tendão calcâneo de camundongos Swiss foram cultivadas para condicionamento celular do meio de cultivo que posteriorirmente será aplicado como tratamento. Os animais foram submetidos à tenotomia do tendão direito e tratados com solução salina (SAL), DMEM sem soro (DMEM) e DMEM condicionado em cultura primária de tenócitos (MC) e comparadas ao grupo controle (CTRL). A funcionalidade tendínea foi mensurada através do Índice Funcional de Aquiles (IFA) e a sensibilidade mecânica através do limiar de retirada de pata (PWT) pelo teste de Von Frey. Todas as análises foram realizadas em 7, 14 e 21 dias pós lesão (dpl). Para análise histológica, os tecidos foram corados com HE. Estatística foi realizada por ANOVA de duas vias seguida do pós teste de Tukey, p<0,01. O grupo MC apresentou melhora funcional em 7° e 14°dpl (-40,4±12,6; -36,6±10,4) se comparado aos grupos DMEM (-76,5±11,7; -71,6±7,9, p<0,01) e SAL (-88,8±15; -71,4±12,6 p<0,01). O grupo MC apresentou melhora no limiar de retirada da pata em 7°e 14°dpl (2,24±1,15; 2,66±1,06) se comparado aos grupos DMEM (0,15±0,07; 0,45±0,76 p<0,01) e SAL (0,13±1,15; 0,77±0,95 p<0,01). Na análise histológica o grupo MC apresentou uma melhor organização tecidual com células apresentando um formato mais semelhante ao controle, enquanto os grupos SAL e DMEM se diferem bastante deste. Concluímos que o tratamento com o meio condicionado em cultura primária de tenócitos acelera a recuperação do tendão de camundongos, promovendo melhora na sensibilidade mecânica, na funcionalidade e na organização tecidual no modelo de lesão proposto. UFPA - Universidade Federal do Pará