Tese
Influ??ncia do butirato de s??dio, da cicloheximida e do cloreto de mangan??s na produtividade, glicosila????o e propriedades biol??gicas da tireotrofina humana derivada de CHO
Influence of sodium butyrate, cycloheximide and manganese chloride on productivity, glycisylation and biological properties of human thyrotropin CHO-derived
Registro en:
10.11606/T.85.2014.tde-26022014-111813
Autor
DAMIANI, RENATA
Resumen
A influ??ncia do butirato de s??dio (NaBu), do cloreto de mangan??s (MnCl2), combinados ou isolados, e da cicloheximida (CHX) na s??ntese de tireotrofina humana recombinante (r-hTSH) derivada de c??lulas CHO foi investigada pela primeira vez. Com exce????o da CHX, que gerou uma redu????o de 1,5 vezes na produtividade volum??trica, todos os reagentes geraram um aumento (1,4 vezes para o MnCl2 e 3 vezes para o NaBu e NaBu+MnCl2) na produtividade volum??trica. Tamb??m foi observada uma diminui????o no n??mero de c??lulas vi??veis com a utiliza????o de todos os reagentes. A adi????o destes reagentes ao meio de cultura de c??lulas CHO produtoras de hTSH gerou tamb??m altera????es na glicosila????o do r-hTSH. As altera????es geradas pela presen??a de CHX foram todas negativas, resultando em uma diminui????o de 5,5% no conte??do de ??cido si??lico, 10% na ocupa????o dos s??tios de glicosila????o, al??m de uma diminui????o no conte??do de todos os monossacar??deos neutros. Os demais reagentes, por outro lado, resultaram em altera????es positivas. A presen??a de NaBu no meio de cultura acarretou um aumento de 12% no conte??do de ??cido si??lico e de 3% na ocupa????o dos s??tios de glicosila????o. Com rela????o ??s estruturas de carboidratos presentes no hTSH, foi observado um aumento de 14% nas estruturas bi-anten??rias, aumento no conte??do de manose e fucose e uma diminui????o no conte??do de galactose e N-acetilglucosamina. A presen??a de MnCl2 no meio de cultura resultou em um aumento de 1,7% no conte??do de ??cido si??lico e de 1,3% na ocupa????o dos s??tios de glicosila????o. Houve ainda um aumento no conte??do de manose e N-acetilglucosamina e uma diminui????o no conte??do de fucose e galactose. Um aumento de 7% na freq????ncia de estruturas bi-anten??rias foi tamb??m observado quando MnCl2 foi utilizado. O uso simult??neo de NaBu e MnCl2 proporcionou um aumento de 14% no conte??do de ??cido si??lico e de 3% na ocupa????o dos s??tios de glicosila????o, bem como um aumento no conte??do de todos os monossacar??deos neutros. N??o houve, entretanto, altera????es na freq????ncia das estruturas de carboidratos. Apesar de todas as altera????es causadas pelos diferentes reagentes, n??o foram observadas diferen??as na atividade biol??gica ou no comportamento farmacocin??tico das diferentes prepara????es de hTSH estudadas. Este estudo ?? extremamente relevante, tanto do ponto de vista do desenvolvimento de novos biof??rmacos, quanto do ponto de vista do controle de qualidade das glicoprote??nas hormonais j?? utilizadas na cl??nica m??dica. Tese (Doutoramento) IPEN/T Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP