Os cogumelos e os micélios são reconhecidos como alimentos funcionais contendo compostos bioativos como, por exemplo, os β-glucanos, os compostos fenólicos e o ergosterol (Pro-vitamina D). Esses compostos apresentam propriedades imunomoduladoras, anticancerígenas e antioxidantes. Além disso, os fungos produtores de cogumelos comestíveis, tem a capacidade de bioacumular elementos traços presentes no substrato, a exemplo, de selênio que intensifica as propriedades nutricionais e bioativas da biomassa microbiana. O soro de leite é um produto secundário da indústria de lacticínios e, se descartado diretamente, tem um alto potencial poluente. Esse soro pode ser aproveitado através de uma fermentação micelial, produzindo compostos bioativos e enzimas de interesse industrial como, por exemplo, a β-galactosidase (β-gal). Assim, neste estudo foi avaliada a produção de compostos bioativos e de proteínas microbianas e a caracterização da β-gal, após 25 dias de crescimento micelial de Pleurotus djamor PLO13, em meio líquido contendo soro de leite reconstituído sem ou com a adição de selênio. O selenito incrementou o teor de β-glucanos, ergosterol, proteínas e da capacidade antioxidante que justifica sua adição no cultivo desse fungo para propósitos nutricional e medicinal. Independente da adição de selênio, P. djamor foi capaz de degradar a lactose com maior taxa de degradação na presença do selenato. A atividade de β-gal apresentou estabilidade em meio ácido, neutro ou básico. O selenato e o selenito tiveram, respectivamente, efeito estimulador e o inibidor da atividade da β-gal em diferentes valores de pH, temperatura e tempo de reação. Em adição, o selênio diminui a afinidade da enzima pelo substrato, entretanto, aumentou a velocidade máxima de conversão da lactose em produto. Portanto, a adição de Se foi positiva para produção e atividade de β-gal de P. djamor PLO13. Os valores da constante de Michaelis- Menten (KM) foram menores para lactose pura que para esse dissacarídeo presente no soro de leite. Assim, além da produção de compostos bioativos a síntese de β-gal utilizando o soro de leite pode ser uma outra alternativa promissora para valorização desse produto secundário.Mushrooms and mycelia are recognized as functional foods containing beneficial bioactive compounds, such as β-glucans, phenolic compounds and ergosterol (Pro-vitamin D). These compounds have immunomodulatory, anticancer and antioxidant properties. Furthermore, fungi that produce edible mushrooms have the ability to bioaccumulate trace elements present in the substrate, for example, selenium that enhances the nutritional and bioactive properties of the biomass. Whey powder is a by-product of the Dairy Industry and, if discarded directly, has a high polluting potential. This by-product can be used to mycelial fermentation, producing bioactive compounds and enzymes of industrial interest, such as β- galactosidase (β-gal). Thus, in this study bioactive compounds and microbial proteins production and characterization of β-gal were evaluated after 25 days of Pleurotus djamor PLO13 mycelial growth, in liquid medium containing reconstituted whey powder, without or with the addition of selenium. Selenite increased the level of β-glucans, ergosterol, proteins and the antioxidant activity that justifies its addition fungus growth for nutritional and medicinal purposes. Regardless of the addition of selenium, the P. djamor was able to degrade the lactose with higher rate of degradation in the presence of selenate. The β-gal enzymatic activity showed stability in acidic, neutral or basic medium. Selenate and selenite had, respectively, stimulatory and inhibitor effect on β-gal activity in different values of pH, temperature and reaction time. In addition, the selenium decreases the affinity of the enzyme for the substrate, but increased the maximum rate of conversion of lactose. Therefore, the addition of Se was positive for the β- gal production and activity. The values of the Michaelis-Menten constant (KM) were lower for pure lactose than for that disaccharide present in whey powder. Thus, the production of bioactive compounds and β-gal in whey powder may be promising alternative for the valorization of this by-product.