Dissertação
Perfil de expressão protéica de larvas de Hysterothylacium sp. (Nematoda) de peixe espada (Trichiurus lepturus) da costa do Rio de Janeiro, Brasil
Profile of the protein expression of Hysterothylacium sp. larvae (NEMATODE) from Sword fish (Trichiurus lepturus) of the Rio de Janeiro coast, Brazil
Registro en:
MANTOVANI, Cynthia. Perfil da expressão proteica de larvas de Hysterothylacium sp. (NEMATODA) de peixe espada (Trichiurus lepturus) da Costa do Rio de Janeiro, Brasil. 2014. 84 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica Agrícola) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa. 2014.
Autor
Mantovani, Cynthia
Institución
Resumen
Devido ao aumento do consumo de peixes crus ou mal cozidos, são de grande relevância os estudos para melhor conhecer e caracterizar estes parasitos. Atualmente, as parasitoses provenientes do pescado são consideradas emergentes, subestimadas e/ou negligenciadas. Nesse contexto, buscamos, com a utilização de técnicas de espectrometria de massa, identificar as proteínas mais expressadas por larvas de Hysterothylacium sp. nematoda pertencente a família Anisakidae, causador da parasitose humana denominada anisaquíase a qual apresenta-se potencialmente letal quando ocasiona manifestação alérgica. As larvas de Hysterothylacium sp. analisadas possuíam ceco curto e foram coletadas a partir de peixe espada (Trichiurus lepturus) da costa do estado do Rio de Janeiro, Brasil. Buscou-se, também, descrever as funções e agrupamentos de processos biológicos envolvendo as proteínas mais relevantes. Foram testadas diferentes metodologias de extração, separação de proteínas e espectrometria de massa. Observou-se que, para o procedimento de extração de proteínas, o uso do detergente SDS no tampão permitiu melhores resultados em relação ao tampão de extração CHAPS, este não possibilitou a visualização de bandas no gel de eletroforese monodimensional e, em relação a eletroforese bidimensional, os spots apresentaram-se com baixa intensidade, em ambos os casos a análise por espectrometria de massa foi inviável, no entanto, sendo o primeiro detergente inadequado para a eletroforese bidimensional, a análise das proteínas limitou-se à eletroforese monodimensional. Com relação à espectrometria de massa, verificou-se que as análises do LC-MS/MS apresentaram melhores resultados em relação ao MALDI-TOF/TOF. No total foram identificadas 87 proteínas de diversas famílias, dentre as quais julgamos importante citar as metabólicas, estruturais, ribossomais, sinalizadoras, reguladoras, transportadoras e, também, proteínas imunogênicas, segundo literatura, com a classe das ribossomais apresentando-se como a mais expressivas, totalizando 48% das proteínas identificadas. Com o auxílio do aplicativo ClueGo foram preditos 54x processos biológicos e seus agrupamentos. Este é o primeiro relato das bases moleculares de larvas de Hysterothylacium sp. relacionadas às vias metabólicas deste parasito utilizando-se como estratégia tecnologia de espectrometria de massa. The parasitism is a common phenomenon in aquatic environments. Helminths with zoonotic potential are commonly found in specimens of fish intended for human consumption. Due to the increase of the consumption of raw or undercooked fish, it is of great importance to better understand and characterize these parasites. Actually the fish borne parasites are being considered as emerging, underestimated and/or neglected parasitosis. In this context, mass spectrometry techniques was performed in order to identify the proteins most expressed by the larvae of Hysterothylacium sp. nematode belonging to Anisakid family, that causes of human parasite called Anisakiasis which presents potentially lethal when causes allergic manifestation. Larvae of Hysterothylacium sp. analyzed had short caecum and were collected from Sword fish (Trichiurus lepturus) from the Rio de Janeiro coast, Brazil. It was also our goal to describe the functions and groups of biological processes involving relevant proteins. Different extraction methods were tested for protein segregation and mass spectrometry. It was observed that, for the protein extraction procedure using SDS extraction buffer showed better results compared to the CHAPS extraction buffer, this has not allowed the visualization of bands on one-dimensional gel electrophoresis and in the two-dimensional electrophoresis the spots presented with low intensity, in both the analyses by mass spectrometry were inviable, however, the first detergent is inappropriate for two-dimensional electrophoresis, the protein analysis was limited to one-dimensional electrophoresis. Using the mass spectrometry, it was found that the analysis of LC-MS/MS showed better results in comparison with MALDI-TOF/TOF. A total of 87 proteins from different families were found, among which it was considered important to mention the metabolic, structural, ribosomal, signaling, regulatory, carriers, and, also, immunogenic proteins, according to the literature, with the class of ribosomal presenting itself as the most significant, totaling 48% of the identified proteins. Using the ClueGo application, 54 biological processes were predicted as well their interaction networks. This is the first report of the molecular basis of Hysterothylacium sp larvae related to their metabolic pathways, using as research strategy proteomic technology. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior