Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ)Fundação Educacional de Macaé – FunemacConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) - PIBICO óxido nítrico (NO) é um gás obtido através da oxidação da L-arginina à L-citrulina pela enzima óxido nítrico sintase (NOS) e é uma importante molécula envolvida na resposta imune inata em vertebrados. Nos invertebrados como as ascídias o NO é produzido por células de defesa, os hemócitos. Este trabalho tem como objetivo Identificar e quantificar a produção de óxido nítrico pelos hemócitos da ascídia Phallusia nigra. Para tal, os hemócitos foram corados com azul de toluidina ou hematoxilina e eosina, ou processados para microscopia eletrônica de transmissão. Foram observados oito tipos principais de hemócitos: hemoblasto; célula em anel de sinete; granulócito refrátil univacuolar; célula compartimentar; célula do tipo mórula; nefrócito; célula pigmentar e amebócito. Em seguida, a produção de NO foi quantificada após adição do marcador específico de NO, DAF-FM DA. Os hemócitos foram estimulados com 5 µg/mL, 25 µg/mL e 50 µg/mL de lipopolissacarídeo (LPS) de Eschericchia coli ou Zymosan A de Saccharomices cerevisiae, variando-se o tempo em 30, 60 e 120 minutos. Notou-se que tanto para o LPS como para o Zymosan A houve aumento na produção de NO, em relação ao controle, em todos os tempos e concentrações. Nos ensaios em que foi utilizado o inibidor da NOS, L-NAME, este foi capaz de bloquear a produção de NO induzida por LPS e por Zymosan A. Na utilização de doadores de NO, DETA/NO, observou-se o aumento da produção de NO mais evidente com LPS. Quando os hemócitos foram pré-incubados com inibidores da via de sinalização de proteína quinase C (PKC) ou inibidores de proteína quinase A (PKA) a produção de NO decresceu significativamente para os hemócitos estimulados com LPS e com Zymosan A. Esses dados sugerem que PKA e PKC participam da via de sinalização que regula a ativação de NOS e subsequente produção de NO pelos hemócitos da ascídia P. nigra.