Patente
Método para clonagem, expressão e purificação do polipeptídeo amilóide das ilhotas pancreáticas humanas
Registro en:
PI 0400735-2 A2
Autor
Lopes, Dahabada Helena José
Ferreira, Sérgio Teixeira
Sogayar, Mari Cleide
Degaki, Theri Leica
Colin, Christian
Institución
Resumen
Em 15/04/2016: Anuidade de pedido de patente de invenção no prazo ordinário Depositada Método para clonagem e expressão do polipeptídeo das ilhotas pancreáticas (IAPP) maduro humano sob a forma recombinante, utilizando um sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli baseado no promotor Lacl-T7 RNA polimerase, no qual um fragmento de DNA que contém a seqüência que codifica o peptídeo maduro de IAPP é amplificado por transcrição reversa e reação em cadeia da DNA polimerase (RT-PCR) a partir de RNA total derivado de ilhotas pancreáticas humanas, clonado em vetor de expressão como descrito
acima e expresso em bactérias, e método de purificação empregando-se as etapas de lise das células, centrifugação do meio e resuspensão do precipitado em presença de agente desnaturante, centrifugação da solução, remoção do material insolúvel, coleta e filtração do sobrenadante clarificado, ligação da
proteína a coluna de afinidade contendo íons metálicos imobilizados, clivagem com protease e eluição da rh-lAPP em forma purificada.