Dissertation
Ensaio quantiFERON modificado na leishmaniose visceral canina
Registro en:
SILVA, Paula Rocha Dantas. Ensaio quantiFERON modificado na leishmaniose visceral canina. 2018. 105 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa) –Instituto Gonçalo Moniz, Fundação Oswaldo Cruz, Salvador, 2018.
Autor
Silva, Paula Rocha Dantas
Resumen
A leishmaniose visceral (LV) é uma doença grave que acomete principalmente o homem e o cão, sendo o último o principal reservatório do agente causal, Leishmanias do complexo Leishmania donovani. No Brasil, o programa de controle de leishmaniose visceral tem como principais diretrizes o tratamento de casos humanos, combate ao inseto vetor, identificação e eliminação de cães infectados e medidas de educação em saúde e estabelece como método de detecção da LV canina (LVC) a triagem com um teste rápido (DPP, plataforma de duplo percurso) e a confirmação por um ensaio imunoenzimático. Contudo, somente uma parte dos cães infectados é capaz de transmitir o parasito para insetos vetores. Provavelmente, para o controle da LV, é contraproducente remover das áreas endêmicas cães infectados que exibem a capacidade de controlar a infecção e não infectivos para o inseto vetor. Um ensaio denominado QuantiFERON, utilizado para o diagnóstico da tuberculose, tem despertado interesse em pesquisas sobre leishmaniose. OBJETIVO: No presente trabalho, foi avaliada a eficácia de um ensaio QuantiFERON modificado para a discriminação de cães suspeptíveis e resistentes a LV. MATERIAL E MÉTODOS: Para isso, foi realizada uma avaliação de corte transversal em uma área endêmica de LV, na qual cães foram classificados em grupos: a) sem marcador de infecção ou b) infectados com baixo escore clínico ou c) infectados com alto escore clinico para LV. Além disso, um segundo grupo de cães de área endêmica foi selecionado e classificados como: a) infectados com baixo escore clínico, b) infectados com escore clínico intermediário e c) infectados com alto escore clínico para LV. Um grupo de cães sem infecção, controle negativo de área não endêmica foi utilizado em ambos estudos. No ensaio, amostras de sangue periférico anticoagulado foram incubadas na ausência de antígenos ou na presença de antígenos solúveis Leishmania ou de antígenos recombinantes de Leishmania (rLc2-NT-CT, rLc2-NT-5R-CT ou KMP-11) e a concentração de interferon gama (IFN-γ), inteleucina-2 (IL-2), IL-6, IL-10 e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α). RESULTADOS: Infelizmente devido a problemas técnicos, a mensuração de IFN-γ não pode ser realizada. O ensaio QuantiFERON modificado apresentou utilidade na identificação de cães infectados por Leishmania com as citocinas IL-6, e principalmente TNF- α e IL-10 nos cães com baixo e escore clínico, os antígenos SLA, rLci2-NT-CT e rLci2-NT-5R-CT apresentaram maior potencial, o antígeno KMP-11 não foi útil na maior parte das análises. Nenhum dos antígenos induziram a produção de IL-2 em nenhum dos grupos. CONCLUSÃO: O ensaio QuantiFERON modificado apresentou utilidade na identificação de cães infectados por Leishmania mas não diferenciou cães resistentes de cães susceptíveis a leishmaniose visceral com as citocinas TNF-α, IL-2, IL-10 e IL-6. O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) – Código de Financiamento 001. Visceral leishmaniasis (VL) is a serious disease affecting mainly man and dog, the latter being the main reservoir and the main reservoir of the causative agent, Leishmania of the Leishmania donovani complex. In Brazil, the visceral leishmaniasis control program has as main guidelines the treatment of human cases, combating the insect vector, identification and elimination of infected dogs and health education measures and establishes as a method of detecting canine LV screening with a rapid test (DPP, double-path platform) and confirmation by an enzyme-linked immunosorbent assay. However, only a few infected dogs are able to transmit the parasite to vector insects. Probably, for the control of LV, it is counterproductive to remove from the endemic areas infected dogs that exhibit the ability to control the infection and not infective to the insect vector. A trial called QuantiFERON, used for the diagnosis of tuberculosis, has aroused interest in research on leishmaniasis. OBJECTIVE: In the present study, the usefulness of a modified QuantiFERON assay for the discrimination of susceptible and resistant LV dogs was evaluated. MATERIAL AND METHODS: For this, a cross-sectional evaluation was performed in an endemic LV area, in which dogs were classified into groups: a) without infection detected or b) infected with low clinical score or c) infected with high LV clinical score. In addition, in a longitudinal evaluation, in which dogs infected with endemic area were followed for two years, these were classified as clinical manifestations in groups: a) infected with low clinical score, b) infected with intermediate clinical score and c) infected with high clinical score for LV.A group of dogs without infection, negative control of non-endemic area was used in both studies. In the assay, anticoagulated peripheral blood samples were incubated in the absence of antigens or in the presence of soluble Leishmania antigens or recombinant Leishmania antigens (rLc2-NT-CT, rLc2-NT-5R-CT or KMP-11) and the concentration of interferon gamma (IFN-γ), inteleucin-2 (IL-2), IL-6, IL-10 and tumor necrosis factor alpha (TNF-α). RESULTS: Unfortunately due to technical problems, the measurement of IFN-γ can not be performed. The modified QuantiFERON assay proved to be useful in the identification of Leishmania-infected dogs with IL-6 cytokines, especially TNF-α and IL-10 in resistant and low-grade dogs, and the SLA antigens, rLci2-NT-CT and rLci2 -NT-5R-CT showed higher potential, the KMP-11 antigen was not useful in most analyzes. None of the antigens induced IL-2 production in either group. CONCLUSION: The modified QuantiFERON assay had a high potential in the identification of the infection even in the group of dogs without infection detected by the other tests applied, the rLci2-NT-CT recombinant antigen inducing IL-10 production had the highest potential in the QuantiFERON assay modified.