Dissertation
A ação da microbiota nativa de Lutzomyia longipalpis no desenvolvimento de Leishmania spp
Registro en:
CAMPOLINA, Thais Bonifácio. A ação da microbiota nativa de Lutzomyia longipalpis no desenvolvimento de Leishmania spf. 2017. 60 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde - Concentração Biologia Celular e Molecular)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Instituto René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte, 2017
Autor
Campolina, Thais Bonifácio
Resumen
As leishmanioses são doenças causa
das por protozoários do gênero
Leishmania
e transmitidas
pela picada dos flebotomíneos. O es
tudo da microbiota intestinal de
Lutzomyia longipalpis
é
importante para determinar uma possível influê
ncia na competência vetorial desse inseto.
In
vitro,
a ação da microbiota sobre o parasito foi av
aliada demonstrando a lise na parede celular
de
L. infantum chagasi
e
L. braziliensis,
causada por
Serratia marcescens
. Em estudos
realizados
in vivo,
autores observaram uma redução no nú
mero de flebotomíneos infectados
com
Leishmania
mexicana
pré-alimentados com
Pseudozyma sp., Asaia sp.
e Ochrobactrum
intermedium.
Estes estudos sugerem que a microbiota
do vetor pode modular a sua infecção
por
Leishmania
, porém o seu papel ainda não esta cl
aro. O trabalho aqui apresentado teve
como objetivo caracterizar e av
aliar o papel da comunidade bacteriana intestinal do
Lu.
longipalpis
no desenvolvimento e diferentes espécies de
Leishmania
spp
.
Métodos
morfológicos e moleculares foram utilizados para identificar e mapear a microbiota intestinal.
O DNA das bactérias isoladas foram extraídos,
a região 16S amplificada, utilizando-se um
iniciador específico para esta região do
DNA bacteriano. Em seguida, foram purificados,
sequenciados e analisados em bancos de dados. Foram obtidas 60 UFCs (Unidades
Formadoras de Colônias) e classificadas taxonomicamente em 10 gêneros bacterianos. A
atividade lítica ou efeito
in vitro
dessas bactérias nativas isoladas de
Lu. longipalpis
(Gruta da
Lapinha) foi analisada por co-cultu
ra utilizando promastigotas de
Leishmania (L.) infantum
chagasi,
Leishmania (L.) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis
e
Leishmania (L.) major
na concentração de
4 x 10
6
parasitas / mL e incubadas com di
ferentes gêneros de bactérias na
concentração de 1 x 10
8
UFC / mL. Quando os parasitas foram co-cultivados com o gênero
bacteriano
Lysinibacillus
todos os parasitas de
L. infantum chagasi
e
L. amazonensis
morreram em até 24h.
L.
braziliensis
e
L. major
em até 48h de co-c
ultivo. Entre 96 a 144
horas, não observou-se a lise de todos os parasitas de
L. infantum chagasi e L. amazonensis
co-cultivados com
Pseudomonas
e
Enterobacter
. As bactérias
Pseudomonas, Enterobacter e
Erwinia
quando co-cultivadas com
L. braziliensis
e de
L. major
co-cultivados com
Pseudomonas
,
Enterobacter
e
Enterococcus.
Os gêneros
Lysinibacillus
e
Serratia
apresentaram efeitos lítico sobr
e todas as quatros espécies de
Leishmania
testadas, abrindo a
perspectiva de serem utilizadas em experimentos
in vivo
. Capes, CNPq (Ciências sem Fronteiras) FAPEMIG Fiocruz/Papes. Leishmaniasis is a disease cau
sed by protozoa of the genus
Leishmania
and transmitted by the
bite of sand flies. The study of
the intestinal microbiota of
Lutzomyia longipalpis
is important
to determine a possible influence on th
e vector competence of this insect.
In vitro
, the action
of the microbiota on the parasite
was evaluated demonstrating
the lysis in the cell wall of
L.
infantum chagasi
and
L. brasiliensis
, caused by
Serratia marcescens. It was observed, in vivo
,
a reduction in the number of phlebotomines infected with
Leishmania mexicana
pre-fed with
Pseudozyma sp
.,
Asaia sp
. and
Ochrobactrum intermedium
. These studies suggest that the
vector microbiota may modulate
Leishmania
infection, but its role
is still unclear. The
objective of this study was to characterize and ev
aluate the role of th
e intestinal bacterial
community of
Lu. longipalpis
in the development and different species of
Leishmania spp
.
Morphological and molecular methods were us
ed to identify and map the intestinal
microbiota. DNAs were extracted from bacteria is
olated from the medium intestine, the 16S
region amplified, using a specific primer for
this region of bacterial DNA. Next, were
purificated, sequenced and analyzed in databases.
The lytic activity or in vitro effect of native
bacteria isolated from
Lu. longipalpis
was analyzed by co-cultivation using
Leishmania
promastigotes of
Leishmania (L.) infantum chagasi,
Leishmania (L.) amazonensis,
Leishmania (V.) braziliensis
and
Leishmania (L.) major
at the concentration of 4 x 10
6
parasites / ml and incubated with different ba
cteria genera in the concentration of 1 x 10
8
CFU
/ mL. Sixty CFUs (Colony Forming Units) were obt
ained and were classi
fied as 10 bacterial
genera. When the parasites were co-cultivated with the bacterial genus
Lysinibacillus
all
parasites of
L. infantum chagasi
and
L. amazonensis
died within 24 hours. And
L. braziliensis
and
L. major
in up to 48h of co-cultivation. Betw
een 96 and 144 hours, all parasites of
L.
infantum chagasi
and
L. amazonensis
co-cultivated with
Pseudomonas
and
Enterobacter
were
not observed. From
L. braziliensis
, only the groups co-cultivated with
Pseudomonas
,
Enterobacter
and
Erwinia
and
L. major
co-cultured with
Pseudomonas, Enterobacter
and
Enterococcus
were not observed. The genus
Lysinibacillus
and
Serratia
presented lytic effects
on all four
Leishmania
species tested. As prospect of
being used in experiments in vivo