Dissertation
Análise da interação de fibrócitos do sangue periférico humano com Leishmania (L.) amazonensis
Registro en:
PINTO, Paolla Roberta de Paula Pereira. Análise da interação de fibrócitos do sangue periférico humano com Leishmania (L.) amazonensis. 2019. 98 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Parasitária)-Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2019.
Autor
Pinto, Paolla Roberta de Paula Pereira
Resumen
As leishmanioses são doenças infeciosas causadas por protozoários intracelulares obrigatórios do gênero Leishmania. Mais de 200 países são endêmicos para esta doença, estimandose que 350 milhões de pessoas estão em risco. A transmissão ocorre quando o inseto vetor regurgita parasitos na derme do hospedeiro mamífero. Células residentes e inflamatórias são atraídas para o local da infecção podendo ocorrer a endocitose e iniciar uma resposta imune frente ao parasito. Os fibrócitos são conhecidos como células hematopoiéticas que expressam proteína pan-leucocitária CD45 e produzem proteínas de matriz extracelular, por exemplo, o colágeno I. Estudos têm definido a participação dos fibrócitos em processos patológicos, sugerindo um papel central no reparo da lesão em doenças infecciosas. Análises da infecção in vitro com promastigotas de L. amazonensis, mostraram que os fibrócitos oriundos de camundongos BALB/c fagocitaram e debelaram a infecção após 72h de interação. No entanto, não existem estudos sobre o papel de fibrócitos humanos nas leishmanioses. Neste contexto, iniciamos as análises da interação in vitro de fibrócitos humanos utilizando promastigotas de L. amazonensis e para isso foi estabelecida a cultura primária e, a partir do 15° dia as culturas de fibrócitos foram infectadas e analisadas por diferentes técnicas. Para a caracterização fenotípica destas células, utilizamos a dupla marcação anti-CD45/HSP47 que se revelou uma excelente estratégia para a identificação dos fibrócitos humanos A avaliação da interação mostrou que os fibrócitos reconhecem o parasito, através de análises ultraestruturais observamos que os fibrócitos emitem projeções citoplasmáticas que enrolaram os parasitos favorecendo a fagocitose. Após 15 dias de interação verificamos que este grupo celular é suscetível a infecção por L. amazonensis, pois observamos a diferenciação das promastigotas em amastigotas, bem como, a sua multiplicação no interior de vacúolos parasitóforos. As amastigotas foram capazes de romper as células e re-infectar outros fibrócitos. A partir das análises da produção dos mediadores químicos inflamatórios verificamos que os fibrócitos respondem a infecção com a produção de citocinas pró e anti-inflamatórias durante os tempos estabelecidos neste estudo, tornando favoráveis as condições para o estabelecimento da infecção. Estes resultados nos permitem sugerir que os fibrócitos humanos podem servir como células hospedeiras na resposta inicial e no desenvolvimento da leishmaniose cutânea, pois parasitos do gênero Leishmania modulam a resposta dos fibrócitos humanos, se multiplica, rompe a célula, e é liberada para infectar outros tipos celulares ou o próprio fibrócito. The Leishmaniasis is an infectious disease caused by an obligate intracellular protozoan of the genus Leishmania. More than 200 countries are endemic for this disease, with an estimated 350 million people at risk. The transmission occurs when the vector insect regurgitates parasites in the dermis of the mammalian host. Resident and inflammatory cells are attracted to the infection site, and endocytosis can occur and initiate an immune response to the parasite. Fibrocytes are known as hematopoietic cells that express CD45 pan-leukocyte protein and produce extracellular matrix proteins, for example, collagen I. Studies have defined the participation of fibrocytes in pathological processes, suggesting a central role in the repair of the lesion in infectious diseases. Analyses in vitro infection with L. amazonensis promastigotes, fibrocytes from BALB/c mice phagocytosed and infected the infection after 72h of interaction. However, there are no studies on the role of human fibrocytes in leishmaniasis. In this context, we began the analyses of the in vitro interaction of human fibrocytes using L. amazonensis promastigotes, and for this, the primary culture was established and, from the 15th day, the perceptions of fibrocytes were infected and analyzed by different techniques. For the phenotypic characterization of these cells, we used double anti-CD45 / HSP47 labelling which proved to be an excellent strategy for the identification of human fibrocytes. The evaluation of the interaction showed that the fibrocytes recognize the parasite, through ultrastructural analyses we observed that
the fibrocytes emit cytoplasmic projections that rolled up the parasites favoring phagocytosis. After 15 days of interaction, we noted that this cell group is susceptible to infection by L. amazonensis, as we observed the differentiation of promastigotes into amastigotes, as well as their multiplication within parasitophorous vacuoles. The amastigotes were able to break down the cells and re-infect other fibrocytes. From the analysis of the production of the inflammatory chemical mediators, we verified that the fibrocytes respond to the infection with the production of pro and anti-inflammatory cytokines during the times established in this study, making favorable the conditions for the establishment of the infection. These results allow us to suggest that human fibrocytes may serve as host cells in the initial response and the development of cutaneous leishmaniasis because parasites of the Leishmania genus modulates the response of human fibrocytes, multiplies, breaks the cell, and is released to infect other types cells or the fibrocyte itself.