Toxoplasma gondii é um protozoário parasito intracelular obrigatório disseminado pelo mundo, capaz de infectar células nucleadas de todos os animais de sangue quente: aves e mamíferos, incluindo o homem. Com grande promiscuidade em relação aos seus hospedeiros intermediários, T. gondii é altamente específico quanto à etapa sexuada de seu ciclo intestinal no seu hospedeiro definitivo, o felino. Apesar da importância do ciclo enteroepitelial para o ambiente, há grandes lacunas no entendimento deste ciclo. Grande parte do conhecimento atual é produto do desenvolvimento de pesquisas in vivo em décadas passadas. Hoje a eutanásia de gatos para fins científicos é praticamente proibida e como não existem linhagens contínuas de enterócitos de felinos disponíveis comercialmente, dificulta a realização de pesquisas in vitro. Assim, neste estudo aplicamos o modelo de cultura primária de células epiteliais intestinais de felinos (CEIF) como ferramenta para reproduzir o ciclo sexuado in vitro e identificar os estágios enteroepiteliais do parasito O monitoramento in situ das células epiteliais intestinais de felino mostrou a reprodutibilidade do fenótipo de enterócitos in vitro e sua característica ultraestrutral. Nas nossas condições experimentais, as monobras na variação da proporção parasito:célula hospedeira, confimou que a relação 1:20 foi determinante para o estabelecimento tanto do ciclo lítico e da cistogênese quanto da indução de formas semelhantes a esquizontes, como revelados por microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Foram identificados esquizontes dos tipos C, D e E, apresentando características morfológicas similares às previamente descritas na literatura com base na análise de intestino de gatos infectados experimentalmente por T. gondii. Estes dados indicam que as CEIF simulam in vitro o microambiente celular natural intestinal do felino que favorece o desenvolvimento da esquizogonia. Esta metodologia abre novas perspectivas para investigação de aspectos biológicos e moleculares envolvidos no ciclo entérico de T. gondii in vitro. Além disso, possibilita agregar conhecimento para o desenvolvimento de novas estratégias direcionadas à intervenção da transmissão do parasito, visando interferir numa das principais vias pelas quais a toxoplasmose se propaga, pelas fezes de felinos contaminando o meio ambiente.Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite protozoan spread throughout the world, capable of infecting nucleated cells of all warm-blooded animals:birds and mammals, including humans. With great promiscuity in relation to its intermediate hosts, T. gondiiis highly specific as to the sexual stage of its intestinal cycle in its definitive host, the feline. Despite the importance of this enteroepithelial cycle to the environment, there are major gaps in the understanding of this cycle. Much of the current knowledge is the product of in vivo research development in the past decades. Today the euthanasia of cats for scientific purposes is practically forbiden and as there are no commercial lines of feline enterocytes, it is difficult to carry out in vitro researches. Thus, in this study we applied the primary culture model feline intestinal epithelial cells (FIEC) as a tool to reproduce the in vitro sexual cycle and to identify the enteroepithelial stages of the parasite. In situ monitoring of feline intestinal epithelial cells showed the reproducibility of the enterocyte phenotype in vitro and its ultrastructural characteristic. In our experimental conditions, the strategies in the variation of the parasite:host cell ratio, confirmed that the ratio 1:20 was determinant for the establishment of both lytic cycle, cystogenesis and the induction of schizonts-like forms, as revealed by light and transmissionelectron microscopies. Schizotypes of types C, D and E were identified, presenting morphological characteristics similar to those previously described in the literature based on the intestine tissue analysis of cats experimentally infected by T. gondii.These data indicate that enterocytes cultures mimic in vitro the natural intestinal cellular microenvironment of the feline that favors the development of schizogony. This methodology opens new perspectives for the investigation of biological and molecular aspects involved in the enteric cycle of T. gondii in vitro. In addition, it allows to aggregate knowledge for the development of new strategies directed to the intervention of the transmission of the parasite, aiming to interfere in one of the main routes through which the toxoplasmosis propagates, by the faeces of felines contaminating the environment.