Introdução: O diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é baseado na visualização ou no isolamento em cultura, ambos são procedimentos demorados e com baixa sensibilidade. Alternativamente, devido à praticidade de execução o Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) pode ser utilizado para detecção de imunoglobulina G (IgG) anti-Leishmania. Objetivo: Avaliar a acurácia e a confiabilidade do ensaio imunoenzimático (ELISA) com frações solúvel (FS) e enriquecida com membrana (FM) de cepa em fase infectiva e não infectiva de Leishmania (Viannia) braziliensis para o diagnóstico da LTA. Método: Estudo de validação de 152 amostras de soro, 76 de pacientes com LTA (diagnosticados por imprint, histopatologia ou cultura) e 76 controles com outros diagnósticos, selecionados randomicamente de uma coorte de 400 indivíduos investigados em um centro de referência no Rio de Janeiro, Brasil, entre 2005 e 2007. Para avaliar a confiabilidade (CCI), amostras randomicamente selecionadas foram testadas duas vezes e de forma mascarada para cada fração antigênica. Foram empregados antígenos obtidos de formas promastigotas infectivas de Leishmania (Viannia) braziliensis (MHOM/BR/02/R.787) em fase estacionária de crescimento. Foram estabelecidos cut-offs para cada antígeno empregado utilizando-se gráficos de Receiver Operating Characteristic Curve (Curva ROC) e a performance dos testes foi comparada através de áreas sob a curva (AUC), sensibilidade, especificidade, valores preditivo positivo e negativo (VPP e VPN) e razões de verossimilhança (RV), utilizando-se o teste qui-quadrado e considerando-se valores de p < 0,05 como significativos A confiabilidade foi analisada utilizando-se o coeficiente de correlação intraclasse (CCI). A amostra foi testada quanto a infectividade através da infecção em cultura de macrófagos (55a. passagem em cultura), lise pelo sistema complemento (7a., 61a. e 68a. passagens em cultura) e produção de óxido nítrico por Leishmania (5a., 32a. e 66a. passagens em cultura). Resultados: Os Cut-offs foram 0,22 (FS) e 0,33 (FM). Ambas as frações discriminaram bem os doentes com AUCs elevadas (p < 0,0001) e não houve diferença entre as frações (p = 0,45). A sensibilidade foi 89,5% para ambas as frações e a especificidade foi 89,5 (FS) e 93,4 (FM); RV+ foi 8,5 (FS) e 13,6 (FM) e os CCIs foram excelentes (FS: 0,96 e FM: 0,90) A amostra permaneceu infectiva até a 68a. passagem, apresentando 7,5% de formas metacíclicas infectantes. A diminuição na produção de óxido nítrico indica que a cepa estava perdendo infectividade. Conclusão: Ambos os antígenos da cepa infectiva ofereceram excelente precisão e acurácia diagnostica para LTA, sugerindo que a escolha possa recair sobre a FS por aspectos de custo e praticidade de execução. A cepa não perdeu a sua infectividade.Background: The diagnosis of American tegumentary leishmaniasis (ATL) is based on the identification or isolation of the parasite, which is time-consuming and has low sensitivity. Alternatively, due to feasibility an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) may be used for the detection of anti-Leishmania IgG. Objective: To evaluate the accuracy and reliability of the ELISA using soluble (SF) and membrane-enriched (MF) antigen fractions from an infective and non infective strain of Leishmania (Viannia) braziliensis. Methods: Validation study of 152 serum samples, 76 from patients with ATL (diagnosed by imprint, culture or histopathology) and 76 controls with other diagnoses, randomic selected of a cohort of 400 individuals investigated at a referral center in Rio de Janeiro, Brazil, between 2005 and 2007. To assess reliability (ICC), randomic selected samples were tested twice and masked with each antigenic fraction. Antigens used were obtained from infective promastigotes forms of Leishmania (Viannia) braziliensis (MHOM/BR/02/R.787) in the stationary phase. Cut-off values were established for each antigens employed based on Receiver Operating Characteristic Curve (ROC curve) and the performance of the testes was compared by areas under the curve (AUC), sensitivity, specificity, positive and negative predictive values (PPV and NPV) and likelihood ratios (LR) were compared using chi-square test and considering significant values of p < 0,05. Reliability was analysed with intraclass correlation coefficient (ICC). Infectivity of the strain was tested by infection on macrophages culture (55a . passage in culture), complement lysis (7a ., 61a . e 68a . passages in culture) e production of nitric oxide by Leishmania (5a ., 32a . e 66a . passages in culture) Results: Cut-off values of 0.22 (SF) and 0.33 (MF) were defined. Fractions provided good discrimination between patients, with a large area under the curve (p < 0.0001), and there was no difference between fractions (p = 0.45). Sensitivity was 89.5% for both fractions and specificity was 89.5% (SF) and 93.4% (MF); + LR was 8.5 (SF) and 13.6 (MF) and ICCs were excellent (SF: 0.96 and MF: 0.90). The sample remain infective until 68a . passage, showing 7,5% of metacíclicas forms. Decrease of nitric oxide production reflects loss of infectivity of strain. Conclusion: Both antigens tested provided precision and accuracy for the diagnosis of ATL, with SF being recommended due to its lower cost and greater feasibility. Strain didn\2019t lost infectivity.