A hepatite B é uma doença infectocontagiosa causada por um vírus do gênero Orthohepadnavirus pertencentes a família Hepadnaviridae. O ser humano é o único reservatório do vírus da hepatite B (VHB) e sua transmissão pode ocorrer pelas vias parenteral, sexual ou vertical. O paciente pode apresentar a forma assintomática, aguda, fulminante ou crônica, sendo suas principais complicações, o desenvolvimento de cirrose e carcinoma hepatocelular. A Organização Mundial da Saúde calcula que, em 2015, 257 milhões de pessoas no mundo estavam infectadas pelo vírus. O vírus é composto por um ácido desoxirribonucleico (DNA) de fita dupla envelopado e apresenta três antígenos importantes: o antígeno de superfície s (HBsAg), do capsídeo (HBcAg) e o antígeno e (HBeAg). A vacinação é a medida mais efetiva para a profilaxia da doença. No Brasil, as vacinas contra hepatite B utilizadas atualmente são disponibilizadas gratuitamente pelo Programa Nacional de Imunizações (PNI) e produzidas por meio da tecnologia de DNA recombinante para expressão do HBsAg em leveduras, cujas espécies e metodologias envolvidas variam de acordo com o produtor. O Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde da Fundação Oswaldo Cruz (INCQS/Fiocruz) é responsável pelo controle da qualidade das vacinas utilizadas no PNI, realizando, dentre outros ensaios, a avaliação da potência das vacinas contra a hepatite B. O ensaio de potência é realizado in vitro, utilizando um teste imunoenzimático (ELISA) para a quantificação do HBsAg presente na vacina. Para a realização deste ensaio, utiliza-se uma vacina de Referência de Trabalho, testada em paralelo às vacinas em análise, para cada produtor, conforme especificado pela Farmacopeia Brasileira. O presente estudo teve como objetivo a eleição de um lote candidato a vacina de Referência de Trabalho Específica para o Produto. Para isto, após análise documental foi selecionado um lote candidato, o qual foi submetido a repetidos ensaios de potência realizados por dois analistas distintos, em dias diferentes, cujos resultados foram submetidos a critérios de aceitação de ensaio baseados em análises estatísticas (desvios de linearidade e paralelismo) e cujas absorbâncias de cada diluição foram utilizadas para elaboração de um gráfico de controle, estabelecendo limites máximo e mínimo aceitos. Todos os ensaios foram considerados satisfatórios, não apresentando desvios de linearidade e paralelismo, e potências estimadas superiores a 75% do valor rotulado pelo produtor. As absorbâncias de cada diluição se mantiveram dentro dos limites estabelecidos pelo gráfico de controle. Portanto, o lote candidato à vacina de Referência de Trabalho atendeu aos requisitos necessários para se tornar o novo lote de vacina de Referência de Trabalho.Hepatitis B is an infectious disease with caused by a virus of the genus Orthohepadnavirus belonging to the family Hepadnaviridae. The humans are the only reservoirs of the hepatitis B virus (HBV) and this disease can be transmitted by parenteral, sexual or vertical routes. The patient may present an asymptomatic, acute, fulminant or chronic form, and its main complications are the development of cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The World Health Organization estimates that by 2015, 257 million people were infected worldwide with the virus. The virus is composed of an enveloped deoxyribonucleic acid (DNA) and has three important antigens: the surface antigen (HBsAg), the capsid (HBcAg) and the antigen e (HBeAg). Vaccination is the most effective way for prophylaxis of the disease. In Brazil, hepatitis B vaccines, are currently available provided by the National Immunization Program (PNI) and produced using recombinant DNA technology for the expression of HBsAg in yeast, whose species and metodologies vary according to the producer. The National Institute of Quality Control in Health of the Oswaldo Cruz Foundation (INCQS / Fiocruz) is responsible for the quality control of the vaccines supplied by PNI, conducting, among other tests, an evaluation of the potency of vaccines against hepatitis B. The test is performed in vitro using an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the quantification of HBsAg present in the vaccine. For its execution, use a Working Reference vaccine, tested in parallel to the vaccines under analysis, for each producer, based on the Brazilian Pharmacopoeia requirements. The present study aimed at the election of a candidate batch of Working Product Specifc Reference vaccine. For this, after the preliminary documentary analysis one batch was selected, which was subjected to a matrix of potency tests runs by two different analysts, on different days, from the results obtained, the absorption of each dilution were used for the elaboration of a control chart, setting accepted maximum and minimum limits. All the tests were considered satisfactory, presenting no linearity and/or parallelism deviations, and estimated potencies were higher than 75% of the producer labeled value by. The absorbances of each dilution were kept within the limits established by the control chart. Therefore, the candidate lot of the Labor Reference Vaccine met the requirements necessary to become the new Working Reference Vaccine lot.