O ensaio de neutralização por redução de placas de lise em 96 orifícios (micro-PRNT) para o vírus de Febre Amarela é o método preconizado para a avaliação da resposta imune protetora após a vacinação, onde os seus resultados numéricos são classificados em negativos ou positivos, se estiverem abaixo ou acima da linha de corte de 794 mUI/mL, onde valores numéricos iguais ou próximos a linha de corte têm uma grande chance significativa de serem inconclusivos, este intervalo de incerteza é designado como "zona cinza". Neste trabalho, a incerteza foi determinada de maneira metrologicamente consistente para classificar os resultados como negativos, indeterminados ou positivos. Foram avaliados dados obtidos na validação, da calibração do soro in-house contra o soro de referência internacional e de outros estudos. A incerteza expandida, com um fator de abrangência de 95,45%, do ensaio micro- PRNT foi de ±0,41 log10 mUI/mL, onde foram considerados os maiores componentes avaliados. Considerando a linha de corte de 2,90 log10 mUI/mL, a zona cinza foi delineada entre 2,49 log10 mUI/mL a 3,31 log10 mUI/mL, equivalente a 309,03 mUI/mL a 2041,74 mUI/mL. A partir deste delineamento, um algoritmo decisório foi ilustrado por meio de um fluxograma em que, para os resultados com valores compreendidos dentro da zona cinza, é indicada a realização de três novos ensaios e caso, pelo menos dois apontarem resultados com a mesma classificação, o indivíduo deverá ser revacinado ou não. Obtendo-se como principal benefício, a segurança quanto à decisão de revacinação e uma avaliação mais criteriosa dos soros analisados.The neutralization test for reduction of lysis in 96 wells is the reference method for the evaluation of the protective immune response after vaccination and their numerical results are classified according to cutoff of 794 mIU/mL as positive or negative. Numerical values equal or close to the cutoff have a significant chance to be inconclusive and this interval of uncertain results is designated \201Cgray zone\201D. In this work, the uncertainty of measurement was determined metrologically to classify the results as negative, indeterminate or positive. Datas obtained from validation studys, characterization of anti-yellow fever in-house reference serum calibrated and standardized against an international reference serum used in study of immunogenicity assessment for vaccines and other studies were evaluated. The expanded uncertainty for a coverage probability 95,45%, was ± 0.41 log10 mIU/mL, the worst case components evaluated were combined. Considering the cutoff 2,90 log10 mIU/mL, the gray zone was delineated between 2.49 log10 mIU/mL and 3.31 log10 mIU/mL, equivalent to 309.03 mIU/mL at 2041.74 mIU/mL. From this numerical interval, a decision algorithm was illustrated by a flowchart in which, for the results with values comprised within the gray zone, three new tests are indicated and if at least two indicate results with the same classification, the individual should be revaccinated or not. The main benefit is the safety of the revaccination decision and a more careful evaluation of the analyzed serum.