Avaliação comparativa do perfil de expressão e de isoformas associadas a dois homólogos do fator de tradução eIF2γ de Leishmania infantum

dc.contributorMelo Neto, Osvaldo Pompílio de
dc.contributorBezerra, Maria José Ribeiro
dc.contributorMelo Neto, Osvaldo Pompílio de
dc.contributorMelo, Tatiany Patrícia Romão Pompílio de
dc.contributorMoretti, Nilmar Silvio
dc.creatorSilva, Rafaela Mikaella Arruda Martins da
dc.date2022-10-06T15:53:56Z
dc.date2022-10-06T15:53:56Z
dc.date2021
dc.date.accessioned2023-09-26T20:59:13Z
dc.date.available2023-09-26T20:59:13Z
dc.identifierSILVA, Rafaela Mikaella Arruda Martins da. Avaliação comparativa do perfil de expressão e de isoformas associadas a dois homólogos do fator de tradução eIF2γ de Leishmania infantum. 2021. 83 p. Dissertação, (mestrado)-Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2021.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/55020
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8867298
dc.descriptionOs tripanosomatídeos são protozoários patogênicos dos gêneros Leishmania e Trypanosoma que possuem mecanismos moleculares únicos associados à sua expressão gênica. Acredita-se que a etapa de iniciação da tradução seja um dos principais alvos de regulação da expressão gênica nestes parasitas. O fator eIF2 é responsável por mediar a associação do GTP e do tRNA ligado a Metionina inicial (Met-tRNAi) com a subunidade menor ribossomal e é formado pelas subunidades α, β e γ, com o eIF2γ constituindo o núcleo do complexo. Em Leishmania, a descoberta de dois homólogos de eIF2γ (EIF2γ-1 e EIF2γ-2) ressalta a possibilidade de sua ação em eventos de regulação. Este trabalho teve início com análises de expressão usando soro policlonal dirigido a ambos os homólogos de eIF2γ de Leishmania que foi capaz de reconhecer os dois homólogos quando superexpressos de forma ectópica, entretanto apenas o EIF2γ-1 nativo foi reconhecido de forma clara e reprodutível. Em curvas de crescimento da forma promastigota de L. infantum, foram vistas duas isoformas para o EIF2γ-1 durante crescimento exponencial, com diminuição da isoforma de maior tamanho a partir de 120h. Em curva de crescimento amastigota, o EIF2γ-1 apresenta duas isoformas. Esse padrão se manteve inalterado em condições de estresse de temperatura, nutricional e oxidativo. Em nenhuma dessas condições se observou maior expressão do EIF2γ-2 nativo, cuja abundância foi tentativamente estimada, com níveis de 10 a 30 vezes menores do que os do EIF2γ-1. As isoformas observadas para o EIF2γ-1 sugere alterações por modificações pós-traducionais. Para investigar e mapear possíveis sítios alvos dessas alterações foram realizados ensaios de mutagênese sítio dirigida no gene codificante do EIF2γ-1 em motivos candidatos. Os genes mutantes foram clonados em vetor para expressão no parasita fusionado ao epítopo HA, seguido de transfecção em L. infantum. O impacto destas mutações foi avaliado e não afetaram o perfil de expressão das isoformas.
dc.descriptionTrypanosomatids are pathogenic protozoa of the genera Leishmania and Trypanosoma that have unique molecular mechanisms associated with their gene expression. It is believed that the translation initiation step is one of the main targets of gene expression regulation in these parasites. The eIF2 factor is responsible for mediating the association of GTP and initial Methionine-bound tRNA (Met-tRNAi) with the smaller ribosomal subunit and is formed by α, β, and γ subunits, with eIF2γ constituting the nucleus of the complex. In Leishmania, the discovery of two eIF2γ homologues (EIF2γ-1 and EIF2γ-2) highlights the possibility of its action on regulatory events. This work started with expression analyzes using polyclonal serum directed to both homologues of Leishmania eIF2γ which was able to recognize the two homologues when overexpressed ectopically, however, only native EIF2γ-1 was recognized clearly and reproducibly. In growth curves of the promastigote form of L. infantum, two isoforms for EIF2γ-1 were seen during exponential growth, with a decrease in the larger isoform after 120h. In an amastigote growth curve, EIF2γ-1 has two isoforms. This pattern remained unchanged under conditions of temperature, nutritional and oxidative stress. In none of these conditions was observed greater expression of native EIF2γ-2, whose abundance was tentatively estimated, with levels 10 to 30 times lower than those of EIF2γ-1. The observed isoforms for EIF2γ-1 suggest alterations due to post-translational modifications. To investigate and map possible target sites for these alterations, site-directed mutagenesis assays were performed on the EIF2γ-1 encoding gene in candidate motifs. Mutant genes were cloned into a vector for expression in the parasite fused to the HA epitope, followed by transfection into L. infantum. The impact of these mutations was evaluated and did not affect the expression profile of the isoforms .
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjecttrypanosomatina
dc.subjectleishmania infantum
dc.subjectfatores de iniciação em eucariotos
dc.subjectfator de iniciação 2 em eucariotos
dc.subjecttrypanosomatin
dc.subjectleishmania infantum
dc.subjectinitiation factors in eukaryotes
dc.subjectinitiation factor 2 in eukaryotes
dc.subjecttripanosomatina
dc.subjectleishmania infantil
dc.subjectfactores de iniciación en eucariotas
dc.subjectfactor de iniciación 2 en eucariotas
dc.subjecttrypanosomatine
dc.subjectleishmania infantum
dc.subjectfacteurs d'initiation chez les eucaryotes
dc.subjectfacteur d'initiation 2 chez les eucaryotes
dc.subjectTrypanosomatina
dc.subjectLeishmania infantum
dc.subjectFator de Iniciação 2 em Eucariotos
dc.subjectLeishmaniose
dc.subjectparasitol
dc.subjectMutagênese Sítio-Dirigida
dc.subjectRegulação da Expressão Gênica
dc.subjectAlinhamento de Sequência
dc.subjectEstágios do Ciclo de Vida
dc.subjectEstresse Oxidativo
dc.titleAvaliação comparativa do perfil de expressão e de isoformas associadas a dois homólogos do fator de tradução eIF2γ de Leishmania infantum
dc.typeDissertation


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