No Brasil a criação do Programa Nacional de Imunizações (PNI), em 1973, deu-se no âmbito do processo de formulação de grandes programas nacionais. A partir de agosto de 2012, o PNI introduziu no calendário básico da criança a vacina combinada pentavalente (DTP/HB/Hib), que reúne em uma só dose a proteção contra cinco doenças (difteria, tétano, pertussis, Haemophilus influenza tipo b e hepatite B). A Hepatite B é uma doença causada pela infecção do Vírus da Hepatite B (HBV), um vírus DNA, da família Hepadnaviridae. O envoltório externo do HBV contém proteínas antigênicas que constituem o antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg). A Organização Mundial de Saúde calcula que mais de 240 milhões de pessoas estão cronicamente infectadas pelo HBV no mundo. O desafio para o desenvolvimento e a introdução das novas vacinas combinadas em grande parte é sobre o potencial de interação antigênica. Com isso, a eficácia e a segurança de cada componente devem ser avaliadas separadamente e na sua forma final através de ensaios de controle da qualidade. Dentre os ensaios preconizados está o teste de potência que é um ensaio para avaliação da eficácia das vacinas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potência do componente da hepatite B nas vacinas combinadas pentavalente (DTP/HB/Hib) de diferentes produtores, através da metodologia in vitro baseada em ensaio do tipo imunoenzimático – ELISA. Além disso, foram também avaliadas as possíveis interferências dos demais componentes (DTP e Hib) e do adjuvante fosfato de alumínio contidos nas diferentes formulações das vacinas, estudo da estabilidade em situação de estresse a 60ºC por 7 dias e comparação do uso dos kits comerciais Murex e Enxygnost. Um total de dezessete amostras de vacinas combinadas pentavalente com o componente HBsAg, de dois diferentes produtores (A e B), mantidas de 2 a 8ºC foram selecionadas para esse estudo. A metodologia do ensaio in vitro foi estabelecida para avaliação da potência das amostras de vacinas combinadas pentavalente (DTP/HB/Hib) dos produtores A e B. Os resultados encontrados mostraram que não há interferência dos antígenos difteria, tétano, pertussis e Haemophilus influenzae tipo b na avaliação da potência do componente HBsAg. Os lotes de vacina combinada 1622/12 e 3032/12 foram eleitos como referência interna para o produtor A e o produtor B respectivamente. Os kits comerciais selecionados (murex e enzygnost) foram adequados para a proposta do estudo.The Brazilian National Immunization Program (PNI) was created in 1973, during the formulation of the most important national programs in Brazil. Starting on August, 2012, PNI has introduced the Pentavalent Combined Vaccine as part of the children basic calendar, unifying in one dose the protection against five diseases (diphtheria, tetanus, pertussis, Haemophilus influenza type b and hepatitis B). Hepatitis B is a disease caused by the infection of Hepatitis B virus (HBV), a DNA virus from Hepadnaviridae family. The HBV external involucre contains antigenic proteins that are the hepatitis B virus surface antigen (HBsAg). The World Health Organization calculates that over 240 million people around the world are chronically infected by HBV. The challenge for the development and introduction of the combined vaccines is mostly about the potential of antigenic interaction. Thus, the efficacy and safety of each component must be individually evaluated and in its final form through quality control assays. Among the preconized assays, the potency test is the assay that evaluates the vaccines effectiveness. The purpose of this work is to evaluate the potency of hepatitis B component in pentavalent combined vaccines (DTP/HB/Hib) from different manufacturers through in vitro methodology based on enzyme linked immunosorbent assay – ELISA. Moreover, were also evaluated the interference of the other components (DTP and Hib) and the aluminum phosphate adjuvant contained in the different vaccine formulations, stability study in stress situations on 60ºC for seven days and the comparison of using commercial kits Murex and Enzygnost. A total of seventeen samples of pentavalent combined vaccine with HBsAg component from two different producers (A and B) kept from 2ºC to 8ºC were selected for this study. The methodology for the in vitro assay was established to evaluate the potency of pentavalent combined vaccine (DTP/HB/Hib) samples from producers A and B. The results showed that there is no interference with diphtheria, tetanus, pertussis and Haemophilus influenzae type b antigens when evaluating the potency of HBsAg component. The combined vaccines lots 1622/12 and 3032/12 were elected as internal reference to producer A and producer B, respectively. The commercial kits selected (murex and enzygnost) were appropriate for the purpose of this study.