Envolvimento dos receptores P2X7 e A2a na patogênese causada pelo Mycobacterium leprae

dc.contributorPessolani, Maria Cristina Vidal
dc.contributorMoreira, Marcia de Berredo Pinho
dc.creatorPereira, Antonio Marcos Rodrigues
dc.date2020-09-08T19:16:21Z
dc.date2020-09-08T19:16:21Z
dc.date2019
dc.date.accessioned2023-09-26T20:41:31Z
dc.date.available2023-09-26T20:41:31Z
dc.identifierPEREIRA, Antonio Marcos Rodrigues. Envolvimento dos receptores P2X7 e A2a na patogênese causada pelo Mycobacterium leprae. 2019. 124 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular) - Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2019.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/43241
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8862099
dc.descriptionA hanseníase, causada pelo Mycobacterium leprae, um bacilo intracelular obrigatório com tropismo por macrófagos e células de Schwann, é uma doença infecciosa que acomete a pele e os nervos periféricos e pode acarretar danos irreversíveis se não tratada. O Brasil ocupa o segundo lugar no ranking mundial entre os países com maior número de casos doença, o que torna essa enfermidade um importante problema de saúde pública. ATP e adenosina (ADO) extracelulares, assim como um conjunto de ecto-enzimas e receptores constituem os principais mediadores do sistema purinérgico. Este sistema vem sendo amplamente descrito regulando respostas imunes em diferentes modelos de doenças, inclusive infecciosas como a tuberculose. Entretanto, nada foi estudado até os dias atuais sobre o papel deste complexo sistema com relação a patogênese da hanseníase. Assim, o presente estudo buscou avaliar a participação deste sistema na interação de monócitos humanos com o M. leprae. Nossos dados, obtidos a partir de experimentos in vitro, usando as técnicas de citometria de fluxo e western blotting mostram que o M. leprae aumenta a expressão das ecto-enzimas CD39 e CD73 e adenosina desaminase (ADA) que hidrolisam ATP/ADP em AMP, AMP em ADO e ADO em inosina (INO) respectivamente, após 24h de infecção, entretanto, após 48h de infecção a expressão de CD73 e ADA parecem ser diminuídas frente a infecção Estes dados sugerem que a regulação dos níveis extracelulares destes mediadores purinérgicos parece ser relevante na interação monócito-M. leprae. A infecção também aumentou a expressão de panexina 1, uma proteína envolvida na secreção de ATP, mas diminui a expressão do receptor P2X7, que ativa uma resposta pró-inflamatória, e aumenta a expressão do receptor A2A, um potencial receptor anti- inflamatório. Estes dados em conjunto suportam a hipótese de que a infecção deve estar reduzindo os níveis extracelulares de ATP, em contrapartida, deve aumentar os níveis de ADO/INO no meio extracelular após 24h, entretanto, após 48h, os níveis de ADO/INO estariam reduzidos. Dados de LC-MS/MS mostram que a infecção após 48h reduz os níveis de INO e de seus metabólitos, hipoxantina, xantina e ácido úrico, quando comparada às células não infectadas, sugerindo que a produção de ácido úrico não seria benéfica para o estabelecimento da infecção. Observamos, ainda por ensaios de ELISA usando agonistas e antagonistas do receptor A2a, que este parece regular positivamente a produção de IL-10 e IL-1beta e da quimiocina MCP1, entretanto, sua ativação reduz a produção de IL8. A produção de IL-1beta também foi aumentada com o tratamento com ATP. M. leprae subverte o metabolismo lipídico do hospedeiro em seu benefício e a literatura mostra que o receptor P2X7 e receptor A2a estão envolvidos na homeostase lipídica.
dc.descriptionLeprosy, caused by Mycobacterium leprae, an obligate intracellular bacillus with tropism for macrophages and Schwann cells, is an infectious disease that targets skin and peripheral nerves and can carry irreversible damage. Globally, Brazil ranks second ranking among the countries with the highest number of disease cases, making this disease a major public health problem. Extracellular ATP and adenosine (ADO), as well as a set of ecto-enzymes and receptors constitute the main mediators of the purinergic system. This system is widely described as a regulator of the immune response in different pathologies, including infectious diseases such as tuberculosis. In the meantime, no studies on the role of this complex system related to leprosy pathogenesis have been described so far. Thus, the present study, seeked to assess the participation of this system in M. leprae -human monocytes interaction. Our data, obtained from in vitro experiments, using Flow cytometry and western blotting techniques showed that M. leprae increases the expression of the ecto-enzymes CD39 and CD73 and adenosine deaminase (ADA) that hydrolyse ATP / ADP into AMP, AMP into ADO and ADO into inosine (INO) respectively, after 24h of infection, meanwhile, 48h post-infection the expression of CD73 and ADA seemed to be reduced These results suggest that two extracellular levels of purinergic mediators seem to be relevant to the monocyte-M. leprae interaction. In addition, infection also increased the expression of panexin 1, a protein involved in ATP secretion, but decreased P2X7 receptor level, which is known to activate a pro-inflammatory response and increase the A2A receptor, a potential anti-inflammatory receptor. These data together support the hypothesis that infection is reducing extracellular ATP levels, in contrast, it is increasing ADO / INO levels in the extracellular environment after 24h, however, after 48h, ADO / INO levels would be reduced. LC-MS/MS data show that infection after 48h reduces the levels of INO and its metabolites, hypoxanthine, xanthine, and uric acid when compared to uninfected cells, suggesting that uric acid production would not be beneficial for establishment of the infection. We also observed by ELISA assays using A2a receptor agonists and antagonists that it appears to positively regulate IL-10 and IL-1beta and chemokine MCP1 production, however, their activation reduces IL8 production. ATP treatment also increased IL-1beta production. M. leprae subverts the host lipid metabolism to its benefit and the literature shows that the P2X7 receptor and A2a receptor are involved in lipid homeostasis.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjectHanseníase
dc.subjectReceptores Purinérgicos P2X7
dc.subjectMycobacterium leprae
dc.subjectReceptor A2A de Adenosina
dc.subjectHanseníase
dc.subjectReceptores Purinérgicos P2X7
dc.subjectMycobacterium leprae
dc.subjectReceptor A2A de Adenosina
dc.titleEnvolvimento dos receptores P2X7 e A2a na patogênese causada pelo Mycobacterium leprae
dc.typeDissertation


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