Staphylococcus spp. tem grande importância clínica e em alimentos. Os últimos levantamentos de órgão oficiais mostram o Staphylococcus aureus (S. aureus) como um dos principais agentes etiológicos de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA), devido a sua capacidade de produzir toxinas. De modo correlato, diversas espécies de estafilococos coagulase negativa (ECN) têm emergido como enterotoxigênicas em isolados de alimentos, e não somente como bactérias oportunistas de isolados clínicos. Os laticínios, dentre eles os queijos, estão entre os alimentos mais comumente associados a surtos de DTA. Sendo o queijo Minas frescal um alimento tipicamente brasileiro e de caraterísticas favoráveis à proliferação de microrganismos, o presente estudo teve como objetivo a detecção de genes que codificam enterotoxinas clássicas (EE), toxinas esfoliativas (TE), toxina da síndrome do choque tóxico (TSST), leucocidina de panton-valentine (PVL) e resistência a antibióticos em S. aureus e estafilococos coagulase negativa (ECN) isolados de queijo Minas frescal. Foram coletadas 10 amostras comercializadas no Rio de Janeiro no período de fevereiro a abril de 2016. Foi feita a semeadura em ágar Baird Parker suplementado com plasma fibrinogênio de coelho (BPA-RPF) e ágar manitol salgado (MSA) e os isolados foram caracterizados através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Na contagem em placa em BPA-RPF, somente uma amostra estava fora dos critérios microbiológicos para estafilococos coagulase positiva, estipulados pela Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) nº 12 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Enquanto em MSA, 40% das amostras estão inadequadas. Em 10 amostras, foram isolados 140 ECN e 32 S. aureus. Os resultados mostraram que 27,9% (48/172) dos isolados de Staphylococcus spp. carreavam pelo menos um gene de produção de EE ou TE. O gene mais prevalente foi o da TEA - eta (39,3%), seguido do sed (26,2%). Nenhum isolado carreou o gene para resistência a meticilina, mecA, ou TSST ou PVL. Independente da capacidade de produção da toxina, medidas de controle são necessárias, como a manutenção da cadeia de frio e boas práticas de higiene para evitar a disseminação e proliferação desses isolados.Staphylococcus sp. has a worldwide clinical and food impact and recent official publications show Staphylococcus aureus (S. aureus) as a major pathogen of Foodborne Diseases (FBD) due to its ability to produce toxins. Besides, coagulase negative staphylococci (CoNS) emerged as enterotoxigenic in food isolates, and not just as opportunistic bacteria from clinical isolates. In addition, dairy products have been associated frequently with FBD and Minas frescal is a typical Brazilian cheese with favorable conditions for proliferation of microorganisms. The aim of this study was to detect staphylococcal enterotoxins (SE), exfoliative toxins (ET), toxic shock syndrome toxin (TSST), leucocidin of panton-valentine (PVL) and resistance to methicillin genes in S. aureus and CoNS isolated from Minas frescal cheese. Ten samples marketed in Rio de Janeiro were collected from February to April of 2016. Enumeration was carried out by plating on Baird Parker agar with rabbit fibrinogen plasma supplement (BPA-RPF) and mannitol salt agar (MSA). The isolates were characterized by Polymerase Chain Reaction (PCR). In the plate count in BPA-RPF, only one sample had contamination levels above the standard set by RDC n.12 for the coagulase positive staphylococci. While in MSA, 40% of the samples were in the same conditions. On 140 ConS and 32 S. aureus isolated, 27.9% (48/172) carried at least one gene for ET or SE. The most prevalent gene was eta (39.3%), followed by sed (26.2%). Genes mecA, tsst or pvl were not detected. Despite the ability for toxin production, preventative measures, such as maintenance of the cold-chain and good hygienic practices should be implemented to prevent the spread of pathogenic strains.