A leishmaniose é um grave problema de saúde pública, sendo considerada uma doença extremamente negligenciada, para a qual ainda não existe vacina licenciada para uso em humanos e o tratamento é caro e tóxico. Na busca para o desenvolvimento racional de novos fármacos, a escolha de um alvo seletivo no parasito é essencial. Enquanto os mamíferos produzem colesterol, os tripanossomatídeos produzem esteróis com esqueleto ergostano, como o ergosterol. O passo divergente da via dos parasitos é a transferência de um grupamento metila da S-adenosilmetionina (SAM) para o carbono 24 de esteróis com estrutura colestano, formando uma ramificação no C24 não existente nos esteróis de mamíferos, catalisado pela enzima esterol 24-C-metiltransferase (ERG6). Sendo assim, é proposta do presente trabalho estabelecer uma estratégia para a prospecção de fármacos inibidores da enzima ERG6 de Leishmania spp. Para esse objetivo, preparamos cepas de L. infantum e L. amazonensis que superexpressam a ERG6. A confirmação da expressão gênica aumentada em ambas cepas de Leishmania foi confirmada por PCR quantitativo (qPCR) em diferentes condições experimentais Em seguida, essas cepas foram utilizadas para realização de triagem de fármacos. Promastigotas e amastigotas de Leishmania spp. superexpressando ou não o alvo estudado foram incubados com os diferentes compostos por 72h. Promastigotas de L. amazonensis superexpressando a ERG6 se tornaram resistentes aos azapterocarpanos LQB 333, 336, 339 e 341, e a cepa recombinante de L. infantum se tornou resistente às substâncias LQB 336, 339, 341 e 343. Em relação aos azasteroides, todos os derivados da série ND apresentaram atividade leishmanicida contra as formas promastigotas de Leishmania spp. Além disso, promastigotas e amastigotas de L. infantum que superexpressam a enzima alvo se tornaram resistentes quando tratadas com as substâncias ND-1 e ND-2. As amastigotas de L. amazonensis que superexpressam a ERG6 também se tornaram resistentes à ND-1 e ND-2. Os resultados apresentados neste trabalho indicam que o mecanismo de ação dos azapterocarpanos e os azasteroides destacados acima pode ser a inibição da ERG6.Leishmaniasis is a serious public health problem and is considered na extremely neglected disease for which there is no vaccine licensed for humans and the first treatment choice is expensive and toxic. Aiming the rational development of new drugs, a new selective target in the parasites is essential. While mammals produce cholesterol, trypanosomatids produce ergostane skeleton sterols, such as ergosterol. The divergent step in the parasite pathway is a methyl group transfer from S-adenosyl methionine (SAM) to carbon 24 of cholestane skeleton sterols, creating a branch in C-24 that doesn’t exist in mammals sterols, catalysed by the enzyme sterol 24-Cmethyltransferase (ERG6). Thus, we propose in this work a prospection strategy for ERG6 inhibitors drugs from Leishmania spp. For this, we performed L. amazonensis and L. infantum strains overexpressing ERG6. We confirmated the gene expression increase by quantitative PCR (qPCR) under different experimental conditions. These strains were then used for drug screening. Leishmania spp. promastigotes and amastigotes overexpressing or not the target studied were incubated with different compounds for 72h. Promastigotes of L. amazonensis overexpressing ERG6 became resistants to azapterocarpans LQB 333, 336, 339 and 341, and the L. infantum recombinant strain became resistant to LQB 336, 339, 341 and 343. About azasteroids, all derivatives of the serie ND presented leishmanicidal activity against promastigotes of Leishmania spp.. Moreover, L. infantum promastigotes and amastigotes overexpressing the target studied became resistant when treated with ND-1 and ND-2. Amastigotes of L. amazonensis overexpressing ERG6 also became resistant to this two compounds. Our results presented in this work indicate that the zapterocarpans and azasteroids mechanism of action might be through ERG6 inibition.