Picrolemma sprucei Hook. f. (Simaroubaceae) é uma planta medicinal utilizada por toda a região Amazônica no tratamento da malária. Nenhum trabalho anterior foi publicado sobre a atividade biológica ou composição química dos frutos desta espécie. No presente estudo, a atividade antimalárica dos frutos de P. sprucei foi avaliada. Além disso, um método analítico simples e rápido baseado em cromatografia em camada delgada-fotodensitometria (CCD-FD) é utilizado para a determinação semi-quantitativa do teor de quassinóides isobruceina B (1) e neosergeolida (2) nos frutos de P. sprucei. Extratos etanólicos do fruto inteiro, pericarpo e sementes (caroços) de P. sprucei exibiram elevada atividade in vitro (CI50 = 0,6, 1,5 e 0,2 mg/mL, respectivamente) frente à cepa K1 do parasita da malária humana Plasmodium falciparum. Frações obtidas em hex, CHCl3, AcOEt, BuOH e MeOH-H2O, por partição liquid-líquido dos extratos etanólicos das sementes e pericarpos, também proveram elevada atividade antimalárica (CI50 = 0,01-3,7 mg/mL para frações obtidas das sementes e CI50 = 0,01-9,1 mg/mL para frações obtidas dos pericarpos). As frações clorofórmicas apresentaram as maiores atividades antimaláricas (CI50 = 10 ng/mL), provavelmente devido ao teor elevado de quassinóides. A fração clorofórmica do extrato da semente exibiu 39,8 % (m/m) de 1 e 3,5% (m/m) de 2 enquanto a fração clorofórmica do extrato do pericarpo continha 5,0 % (m/m) de cada quassinóide. A atividade antiplasmodial das frações foi presumivelmente devida à presença de quassinóides e não-quassinóides ativos. A polpa da fruta e o caroço tem potencial como agentes fitoterápicos.Picrolemma sprucei Hook. f. (Simaroubaceae) is a medicinal plant that is used throughout the Amazon region in the treatment of malaria. No previous report has been published on the biological activity or chemical composition of the fruit of this species. In the present study, antimalarial effects of the fruit from P. sprucei was evaluated. Furthermore, a rapid and simple thin-layer chromatography-photodensitometry (TLC-PD) analytical method is utilized for the semi-quantitative determination of the quassinoids isobrucein B (1) and neosergeolide (2) in P. sprucei fruit. EtOH extracts of the whole fruit, pericarp and seeds (pits) of P. sprucei exhibited high in vitro inhibitory activity (IC50 = 0.6, 1.5 and 0.2 mg/mL, respectively) against the K1 strain of the human malaria parasite Plasmodium falciparum. Hex, CHCl3 , EtOAc, BuOH and MeOH-H2 O fractions obtained by liquid-liquid partitioning of seed and pericarp EtOH extracts provided seed (IC50 = 0.01-3.7 mg/mL) and pericarp (IC50 = 0.01-9.1 mg/ mL) fractions exhibiting high inhibitory activity against P. falciparum. CHCl3 fractions had the highest in vitro antimalarial activities (IC50 = 10 ng/mL), probably due the high quassinoid content. The CHCl3 fraction of the seed extract exhibited 39.8 % (m/m) of 1 and 3.5% (m/m) of 2 while the CHCl3 fraction of the pericarp extract contained 5.0 % (m/m) of each quassinoids. The antiplasmodial activity of the fractions was due presumably to quassinoid and non-quassinoid active components. P. sprucei fruit pulp and pit have potential as phytotherapeutic agents.