RESUMO Espécies do gênero Stemphylium são responsáveis por uma série de doenças de plantas, como as solanáceas, com destaque para a queima-de-estenfílio, que afeta a produtividade de culturas carentes em fungicidas disponíveis. Diante disso, propôs-se com esse trabalho a determinação de um meio de cultura que viabilizasse o crescimento micelial de Stemphylium sp. isolado de cebola para posterior avaliação do efeito do óleo de melaleuca (M. alternifolia), sob diferentes concentrações in vitro, no desenvolvimento desse patógeno. Para isso, no primeiro ensaio foram testados oito meios de cultura: Batata-Dextrose-Ágar (BDA); Suco V-8® Ágar a 5%; Suco V-8® Ágar a 10%; Suco V-8® Ágar a 20%; Suco de Tomate a 5% (ST5%); Suco de Tomate a 10% (ST10%); Suco de Tomate a 20% (ST20%) e Extrato de Malte Ágar 2%. Aos 10 dias e aos 15 dias o maior crescimento foi identificado com os tratamentos ST20% e BDA e opostamente, os tratamentos V8-5% e V8-10% o menor crescimento. No segundo ensaio, o óleo de melaleuca foi testado em cinco concentrações (0; 0,2; 0,4; 0,6 e 0,8%) diluído em BDA e se determinou o IVCM (índice de velocidade do crescimento micelial). O óleo essencial de melaleuca reduziu significativamente o crescimento micelial de Stemphylium sp. com melhor ajuste à equação quadrática y = 28,074x2 - 46,136x + 19,94. Conclui-se que o meio de cultura ST20% proporcionou o maior crescimento in vitro e que o óleo de melaleuca adicionado ao meio de cultura nas concentrações de 0,6 e 0,8% foram capazes de reduzir o IVCM, podendo representar alternativa promissora para o controle deste patógeno.