Aproximaciones al desarrollo de un bacteriófago recombinante reportero de Salmonella Enteritidis y Salmonella Typhimurium, mediante la refactorización in-vitro del genoma de oSan23.

Abstract

Debido a que las enfermedades transmitidas por los alimentos amenazan continuamente la salud pública, la detección sensible de estos patógenos se ha convertido en un tema fundamental. Como una alternativa a los tediosos y laboriosos métodos de detección convencionales, se han desarrollado diferentes técnicas que utilizan fagos informadores recombinantes. En este proyecto se plantea el desarrollo de un fago reportero recombinante, insertando el gen gfp en el bacteriófago oSan23, que infecta células de Salmonella Enteritidis y Salmonella Typhimurium. Se utilizó como base, el protocolo de "Refactorización", para la modificación del genoma del fago oSan23 in-vitro. Se logró estandarizar cada uno de los pasos de la modificación del virus, mostrando que el protocolo es viable con oSan23. Sin embargo, la falta de información acerca de las funciones de los genes y las estructuras correspondientes a las proteínas del bacteriófago dificultan la selección del sitio en el que se espera insertar el gen gfp. El método de refactorización haciendo uso de una única enzima de corte parece ser poco eficiente y dificulta el aislamiento de los fagos recombinantes.