Trabajo de grado - Maestría
Evaluación del gen HER-2 como biomarcador en tumor mamario canino: aproximación epidemiológica y bioquímica
Registro en:
Universidad de Caldas
Repositorio institucional Universidad de Caldas
Autor
Clavijo Maldonado, Alejandro
Institución
Resumen
Ilustraciones spa: Se describieron características epidemiológicas de tumores mamarios caninos (TMC) con énfasis en los factores de riesgo que propenden a la presentación de TMC; raza, predisposición genética, edad, historia reproductiva, influencia hormonal, dieta, masa corporal y características clínicas. Se desarrolló una descripción de la prevalencia del TMC en el Municipio de Manizales, Colombia, tomando como base los pacientes registrados en centros de atención veterinaria. Se realizó la identificación de los patrones de la expresión del gen HER-2 en hembras caninas con TMC, empleando suero sanguíneo mediante las técnicas de ensayo por inmunoabsorción ligado a enzima (ELISA) y espectroscopia infrarroja con Transformada de Fourier (FTIR). Para la detección de concentraciones de proteína HER-2/neu se emplearon los kit ELISA (canino y humano). La toma de espectros IR se realizó en modo absorbancia con rango de frecuencia de 400-4000 cm-1 y resolución de 4 cm-1. El análisis estadístico para la descripción de la prevalencia incluyó prueba de Pearson chi-cuadrado con corrección de Yates y prueba exacta de Fisher (p-value<0.05), riesgo relativo, razón de momios (IC95%) y análisis de supervivencia de Kaplan-Meier. Se elaboraron curvas ROC y la estimación de ABC (IC 95%) para la identificación del punto de corte de las concentraciones en suero sanguíneo de HER-2 usando la prueba de ELISA. El análisis de los picos de expresión IR se realizó mediante la estimación de ABC y ARBC. Las razas puras presentaron una prevalencia del 79,14% y en general, la edad de 9,3 años fue el pico de presentación de neoplasia mamaria. Adicionalmente, la dieta casera posee alta relación con la prevalencia de TMC. El patrón clínico de presentación de TMC afectó principalmente el par mamario inguinal y el índice Kaplan-Meier fue mayor para hembras intervenidas quirúrgicamente desde el diagnóstico que las que no fueron intervenidas. El punto de corte óptimo en la prueba ELISA canina fue ≥0.31 ng/ml, Sn de 71.4% (CI 95%: 41,9%-91,6%) y Sp 67% (CI 95%: 22,3%-95,7%). Las AUC para ELISA canina y humana fueron 0,75 y 0,45 respectivamente. Los espectros IR correspondientes a lípidos (1161 cm-1, 1452 cm-1, 2851 cm-1) son de relevancia para la identificación de expresión del gen HER-2. Los hallazgos del presente estudio permitieron discriminar los estados HER/neu+ y HER-2/neu-, así como las características bioquímicas ligadas a ambos estados. eng: We described the epidemiological characteristics of canine mammary tumors with a focus on the risk factors that promote the presentation of CMT, such as breed, genetic predisposition, age, reproductive history, hormonal influence, diet, body mass, and clinical characteristics. Based on this, we conducted a prevalence description of CMT in the municipality of Manizales, Colombia. The gene expression patterns of HER2 in blood serum collected from female dogs with CMT were determined using enzyme-linked inmunosorbent assay (ELISA) and Fourier-transform infrared spectroscopy (FTIR). The detection of HER2/neu protein levels was done using canine and human ELISA kits. Infrared (IR) spectroscopy was done in absorbance mode at a frequency range of 400-4000 cm-1 and resolution of 4 cm-1. The statistical analyses performed included Pearson’s chi-squared test with Yates’ correction and Fisher’s exact test (p-value<0.05), relative risk, odds ratio (IC95%), and Kaplan-Meier survival analysis. We created ROC curves and estimated the AUC (IC 95%) to identify the ELISA cut-off of HER2 serum levels. The IR analysis of expression peaks was based on the estimation of AUC and RAUC. Purebreds showed a disease prevalence of 79.14% and, in general, the peak of presentation of mammary neoplasia was found at 9.3 years old. Furthermore, a homemade diet was found highly associated with the prevalence of CMT. The clinical presentation of CMT mainly affected the inguinal mammary glands; furthermore, the Kaplan-Meier estimator was greater for females with surgical intervention since diagnosis than for non-intervened females. The optimal cut-off for the canine ELISA tests was ≥0.31 ng/mL with 71.4% sensitivity (CI 95%: 41.9%-91.6%) and 67% specificity (CI 95%: 22.3%-95.7%). AUC for the canine and human ELISA tests were 0.75 and 0.45, respectively. The IR spectra of lipids (1161 cm-1, 1452 cm-1, 2851 cm-1) are relevant to determine HER2 gene expression. The findings of this study allowed discriminating HER/neu+ and HER-2/neu- states, as well as the biochemical characteristics linked to both states. 1. CAPÍTULOINTRODUCTORIO / 2. Objetivos / 2.1 Objetivo general / 2.2 Objetivos específicos / 3. MATERIALES Y MÉTODOS / 3.1. Área de influencia del estudio / 3.2. Población objetivo y análisis epidemiológico / 3.3. Variables de estudio / 3.4. Pacientes y muestras / 3.5. Detección y medición de proteína HER-2 en suero sanguíneo / 3.5.1. Análisis de ELISA / 3.5.2. Análisis FT-IR / 3.6. Análisis de datos / 4. RESULTADOS / Capítulo 1. Canine mammary cancer: clinical implications with specific focus on the HER-2 gene / Capítulo 2. Canine mammary gland tumors: risk factors and their epidemiological influence in Manizales-Colombia / Capítulo 3. ELISA and FTIR: HER2 gene expression in blood serum of canines with mammary tumor / Consideraciones finales / Anexos / Referencias Maestría Magister en Ciencias Biológicas