Thesis
Desenvolvimento e caracterização biológica e imunológica de vírus amarílicos recombinantes expressando antígenos da proteína ASP-2 de amastigotas de Trypanosoma cruzi
Fecha
2011Registro en:
NOGUEIRA.R.T. Desenvolvimento e caracterização biológica e imunológica de vírus amarílicos recombinantes expressando antígenos da proteína ASP-2 de amastigotas de Trypanosoma cruzi. 2011. 215f. Tese (Doutorado em Biologia Celular e Molecular) – Instituto Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2011
Autor
Nogueira, Raquel Tayar
Institución
Resumen
O vírus vivo atenuado de Febre Amarela (FA) YF 17D é uma das vacinas virais mais
seguras e eficazes já administradas a humanos, a qual induz uma resposta imune polivalente.
Estas características tornam este vírus vacinal umaplataforma tecnológica para o
desenvolvimento de novas vacinas. Através da tecnologia do clone infeccioso, nós utilizamos
o arcabouço de YF 17D para expressar epítopo indutor de linfócitos T CD8
+
, TEWETGQI e
um fragmento imunogênico, ambos provenientes da proteína de superfície de amastigota 2
(ASP-2) de Trypanosoma cruzi, parasita causador da Doença de Chagas. Este estudo
objetivou evidenciar o potencial deste vírus em expressar antígenos heterólogos. O epítopo
TEWETGQI foi clonado e expresso baseando-se em doissítios distintos do genoma: na alça
fgda proteína de Envelope (E) (YF17D/E200/Tc) e no sítio de clivagem proteolítico entre
NS2B e NS3 (YF17D/NS2B3/Tc). Uma terceira estratégia envolveu a montagem de um
cassete heterólogo expressando um fragmento imunogênico de 120 aminoácidos de ASP-2
entre as proteínas E e NS1 (YF17D/ENS1/Tc). Nós investigamos se o sítio de expressão
poderia influenciar a imunogenicidade do antígeno heterólogo. Assim, foram gerados vírus
que se replicaram em cultura de células similar ao YF 17DD e permaneceram estáveis
geneticamente após algumas passagens seriadas em célula Vero. A expressão dos antígenos
heterólogos pelos vírus recombinantes revelou distintos padrões de detecção em diferentes
regiões da célula. Outros estudos de caracterizaçãomostraram que os vírus YF17D/E200/Tc e
YF17D/NS2B3/Tc são mais atenuados do que YF 17DD, quando inoculados via intracerebral
em camundongos, sendo YF17D/E200/Tc o mais atenuado. Estudos de imunogenicidade
revelaram que todos os vírus foram capazes de induzir anticorpos neutralizantes para Febre
Amarela e o vírus YF17D/ENS1/Tc induziu anticorpos que reagem especificamente com
amastigotas. Além disso, os vírus recombinantes induziram em camundongos imunizados
uma resposta celular T produtora de interferon-gama(IFN-γ) antígeno-específica, além de
uma resposta balanceada T CD4
+
e T CD8
+
para Febre Amarela. A vacinação de uma
linhagem murina altamente suscetível à infecção por T. cruzicom um regime de dose-reforço
homólogo que utilizou uma formulação de vírus YF 17D recombinantes induziu células T
CD8
+
TEWETGQI específicas após uma única dose, a qual poderia explicar o maior grau de
proteção após desafio com T. cruzi. Assim, concluímos que a plataforma de YF 17D é útil
para expressar antígenos de protozoários (T. cruzi) em regiões funcionais distintas do genoma
com um impacto mínimo na viabilidade viral. Além disso, o uso de novas formulações
contendo diferentes vírus YF 17D recombinantes parece ser uma estratégia promissora, a qual
será explorada para outros patógenos.