Diagnóstico laboratorial da infecção pelo Parvovírus Humano B19 em pacientes com falência hepática aguda

Abstract

A infecção pelo Parvovírus humano B19 (B19V) geralmente é aguda e autolimitada, podendo causar uma ampla variedade de manifestações clínicas. Estudos relatam a ocorrência de hepatite em pacientes imunocompetentes infectados pelo B19V, com manifestações hepáticas que variam desde alterações bioquímicas do fígado até a falência hepática aguda (FHA). O objetivo desse estudo foi otimizar a PCR em tempo real (qPCR) para a detecção e quantificação de DNA-B19V em amostras clínicas e dessa forma determinar a importância deste vírus como um dos agentes de hepatite aguda e fulminante. Para otimizar a qPCR, inicialmente foram testadas um painel de amostras positivas (n= 20) e negativas (n= 36) para o B19V, composto por soros de pacientes infectados pelo HIV, Rubéola, Dengue, Herpesvírus humano 1, Vírus da Hepatite A, Vírus da Hepatite B e um controle positivo para Parvovírus canino a fim de avaliar a especificidade da técnica. Após a extração do DNA viral foi realizada a qPCR através das metodologias Sybr Green® e TaqMan®, utilizando oligonucleotídeos para a região NS1 do B19V e uma curva padrão sintética para quantificação absoluta da carga viral. Após a otimização do teste, amostras de soro e tecido hepático de pacientes com FHA (n=30) foram testados. A metodologia de Sybr Green® apresentou coeficiente de linearidade (R2)=0,99, eficiência de 97% e um limite de detecção de 4,32x10¹cópias/\03BCL. A metodologia de TaqMan® apresentou R2=0,99, eficiência de 95% e um limite de detecção de 1,83 cópias/\03BCL. Na metodologia de Sybr Green® um resultado falso positivo foi observado enquanto que na metodologia de TaqMan® nenhum resultado falso positivo ou falso negativo foi detectado. Desta forma, a metodologia de TaqMan® foi utilizada para avaliar as amostras de pacientes com FHA (n= 30). Entre elas, sete amostras pareadas de soro e tecido hepático foram positivos para B19V-DNA, com cargas virais variando de 1,07 a 8,52 cópias/\03BCL no soro e de 2,5x101 a 1,6x102cópias/\03BCL no tecido hepático. Entre esses pacientes, três tinham hepatite sem origem conhecida (hepatite criptogênica), três hepatite viral (dois por HBV e um por CMV) e um caso hepatite medicamentosa por izoniazida. Entre os pacientes com FHA e B19V, quatro evoluíram ao óbito, dois dos quais estavam coinfectados por HBV e dois com hepatite criptogênica. Esses resultados indicam que o B19V deve ser considerado no diagnóstico diferencial de hepatites criptogênicas e na FHA e demonstram a importância em otimizar um método molecular sensível e específico para diagnosticar esses casos de infecção.