Expressão da proteína de envelope do vírus zika em sistema eucarioto e procarioto para a seleção de anticorpos monoclonais

Abstract

O Zika vírus (ZIKV) é uma arbovírus pertencente a família flaviviridae e ao gênero flavivírus transmitido principalmente pelo mosquito Aedes Aegypti. Recentemente, o Brasil passou por um período de emergência em saúde pública causada pelo ZIKV quando o mesmo foi associado a complicações neurológicas em neonatos. Apesar dos avanços obtidos nos últimos anos, testes rápidos confiáveis para o diagnóstico da doença ainda são escassos. Além disso, possíveis tratamentos como o desenvolvimento de vacinas terapêuticas, ainda não foram alcançados. Sendo assim, esforços para a obtenção de insumos e avaliação dos mesmos como possíveis candidatos ao desenvolvimento de testes rápidos ou para uma imunoterapia se fazem necessários. O objetivo deste trabalho foi realizar a expressão da proteína de envelope do ZIKV utilizando os sistemas de expressão Escherichia coli e células de inseto/baculovírus a fim de avaliar a viabilidade da utilização destas proteínas na seleção e caracterização de anticorpos monoclonais específicos contra ZIKV. A proteínas foi expressa de forma insolúvel em ambos os sistemas com níveis mais elevados de recuperação após purificação da proteína expressa em células de E. coli As proteínas recombinantes obtidas em ambos os sistemas foram reconhecidas pelo anticorpo monoclonal 4G2 específico para flavivírus em ensaios de antigenicidade e também pelos soros de pacientes infectados por ZIKV. Nós observamos também reatividade cruzada com soro de paciente infectado por Dengue vírus (DENV) que ocorreu de forma mais discreta contra a proteína expressa em sistema células de inseto/baculovírus. Camundongos BALB/c foram submetidos a esquema de imunização com ZIKV para obtenção de anticorpos monoclonais. O anticorpo gerado foi capaz de reconhecer, em ensaios imunoenzimáticos, tanto as proteínas de envelope expressas nos sistemas procarioto e eucarioto quanto o vírus, o que indica que as ambas proteínas são aptas para a seleção de anticorpos monoclonais. Após a identificação dos CDRs do anticorpo monoclonal gerado, análises in silico demonstraram que este anticorpo tem afinidade por uma região do domínio III (DIII) da proteína de envelope do ZIKV que é o principal alvo de anticorpos neutralizantes. Estas análises também demonstraram uma possível especificidade deste anticorpo, já que não foi possível observar reconhecimento com a proteína envelope homóologa de DENV. Os resultados aqui apresentados sugerem não haver diferença entre as proteínas recombinantes estudadas quando utilizadas para a seleção de anticorpos monoclonais. O anticorpo gerado neste trabalho parece ser promissor e novos ensaios serão realizados a fim de avaliar a viabilidade para a sua utilização como insumo no manejo de infecções por ZIKV.