Avaliação comparativa de fenótipos associados à virulência de isolados clínicos da família Trichosporonaceae

Abstract

A Família Trichosporonaceae compreende um grande número de basidiomicetos leveduriformes que estão amplamente distribuídos na natureza. Algumas dessas espécies, em especial Trichosporon asahii, Trichosporon asteroides e Trichosporon inkin, possuem a capacidade de causar infecções em humanos. A habilidade das espécies da Família Trichosporonaceae em causar infecções invasivas está relacionada a uma série de fatores de virulência apresentados por elas, os quais são a produção de enzimas líticas, formação de biofilme, resistência a agentes oxidantes, plasticidade metabólica, mudanças fenotípicas e a presença de determinadas moléculas na parede celular do fungo. Enquanto os três primeiros fatores são bastante descritos na literatura científica, os demais são pouco estudados em isolados clínicos. Desta forma, o objetivo desse estudo foi avaliar os diferentes fenótipos de virulência de isolados clínicos da Família Trichosporonaceae. Foram incluídos 79 isolados clínicos identificados fenotipicamente como Trichosporon spp. e identificados à nível de espécie molecularmente através do sequenciamento da subunidade D1/D2 da região 28S do DNA ribossomal. A plasticidade metabólica foi avaliada através do crescimento do fungo utilizando lactato e N-acetilglicosamina. Curvas de crescimento dos isolados frente a essas duas fontes de carbono foram construídas utilizando espectrofotometria e comparadas com o crescimento do fungo na presença de glicose Mudanças fenotípicas foram avaliadas através da observação e contagem de colônias com morfologia rapidamente alterada em comparação com a colônia mãe após repique e incubação a 37 ºC. As moléculas associadas à parede celular analisadas foram melanina e glucuronoxilomanana. A produção de melanina foi analisada espectrofotometricamente após crescimento do fungo em meio de cultura contendo L-dihidroxifenilalanina. A quantificação de carboidratos secretados foi avaliada utilizando a metodologia de dosagem pelo método de ácido-sulfúrico e fenol em microplacas. A espécie predominante foi T. asahii (n=65), seguida de T. inkin (n=4), Apiotrichum montevideense (n=3), Trichosporon japonicum (n = 2), Trichosporon faecale (n=2), Cutaneotrichosporon debeurmannianum (n=1), Trichosporon ovoides (n=1) e Cutaneotrichosporon arboriformis (n=1). Os isolados de T. asahii tiveram melhor crescimento durante os 7 dias em lactato e N-acetilglicosamina. Quanto ao crescimento em glicose, T. asahii cresceu melhor durante as primeiras 72 horas. Somente T. asahii, T. inkin e T. japonicum apresentaram mudanças fenotípicas. Todos os isolados foram produtores de melanina e glucuronoxilomanana, sem diferenças estatisticamente significativas entre as espécies. Esses resultados permitem ampliar os conhecimentos relativos à virulência da Família Trichosporonaceae, consequentemente expandindo o entendimento dos mecanismos de interação patógeno-hospedeiro e suas implicações na tricosporonose invasiva