Caracterização das vesículas extracelulares isoladas das formas epimastigota e tripomastigota metacíclico de distintas cepas de Trypanosoma cruzi

Abstract

Introduction: Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, spontaneously releases extracellular vesicles into the culture medium. In previous studies, showed the importance of EVs release from cell and parasite to communication has been demonstrated. The goal of our study is to characterize the EVs released during the metacyclogenesis in distinct strains of T. cruzi (Y, G and CL). Method: The epimastigote forms of T.cruzi (Y,G and CL) were cultivated in vitro and analyzed during 28 days the metacyclogenesis and EVs. We were characterized size and concentration by NTA. Immunoblotting and CL-ELISA of EVs to detected the expression of gp82, gp90, TS, alpha-GAL and total membrane of the epimastigote and metacyclic trypomastigote forms, respectively. In parallel, we performed the invasion assays and NO production. Results: The concentration of parasites from CL strain was lower than in the Y and G strain curves. The size of the EVs in the CL strain was bigger than in Y and G. Concentration of particles was higher in the Y strain than G and CL strain. We observed the expression of gp82 only in extracts of parasites and EVs from strains G and CL. The EVs isolated from TM forms of CL strain (LIT) have a higher number of particle concentration than the Y and G. CL-ELISA showed that the EVs from Y strain (TM) express more glycoconjugates, mucins and TS than the G and CL strains. We performed the invasion assays and we showed that EVs isolated from TM (Y, G and CL) increase the number of intracellular parasites and the induction of NO production in human monocytes. Conclusion: EVs isolated from different strains have different size, concentration and modulation of interaction with host cells. The parasite development the mechanisms with host interaction and contribute to a better understanding of the diseases cause. In addition to opening perspectives for the identification of potential therapeutic targets in future research.

Introdução: Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas (DC), libera vesículas extracelulares espontaneamente no meio de cultura. Em estudos prévios, foi demonstrada a importância das vesículas extracelulares na comunicação célulacélula e parasito-hospedeiro. O objetivo principal deste estudo é caracterizar as vesículas extracelulares liberadas durante o processo de metaciclogênese em distintas cepas de T. cruzi (Y, G e CL). Método: As formas epimastigotas das distintas cepas de T.cruzi foram cultivadas in vitro e analisadas durante 28 dias para analisar o crescimento, metaciclogênese e liberação das EVs. As EVs foram caracterizadas em tamanho e concentração pelo NTA. Immunoblotting e CL-ELISA das EVs para detectar a expressão de gp82, gp90, TS, alfa-GAL e membrana total do parasito das formas epimastigotas e tripomastigota metacíclico, respectivamente. Em paralelo, foram realizados ensaios de invasão e a produção de Óxido Nítrico. Resultados: A concentração dos parasitos da curva da cepa CL foi inferior às curvas das cepas Y e G. Tamanho das EVs da cepa CL foi maior do que Y e G. A concentração das partículas foi maior na cepa Y do que G e CL. Observamos a expressão da gp82 apenas nos extratos dos parasitos e EVs das cepas G e CL. As EVs das formas TM da cepa CL (LIT) têm uma concentração de partículas maior do que Y e G. CL-ELISA mostrou que as EVs da cepa Y (TM) expressam mais glicoconjugados, mucinas e TS do que as cepas G e CL. Os ensaios de invasão mostram que as EVs (Y, G e CL) dos TM aumentam o número de parasitos intracelulares e a indução na produção de NO. Conclusão: EVs isoladas das distintas cepas possuem variações no tamanho, concentração e modulação da interação com as células do hospedeiro. Os mecanismos de adaptação destes parasitos nos seus hospedeiros contribuem para melhor compreender as doenças por eles causadas. Além de abrir perspectivas para a identificação de potenciais alvos terapêuticos para estudos futuros.