Tese de doutorado
Valor diagnóstico de mutações BRAF, Nraseptertem punções aspirativas indeterminadas de nódulos tiroidianos
Fecha
2021Autor
Alves, Thalita Goulart [UNIFESP]
Institución
Resumen
Introduction: Thyroid nodules are common events and present in 37-68% of the population when imaging tests are used for diagnosis, such as US, computed tomography (CT), nuclear magnetic resonance (MRI) and PET-CT scan. However, only 5 to 15% correspond to malignant neoplasms, and this proportion varies according to gender, age, family history, among others. For this reason, clinical investigation aims to distinguish between benign and malignant nodules in order to avoid unnecessary surgeries. The best diagnostic test is fine needle aspiration biopsy (FNAB), which provides results based on the Bethesda cytopathological classification. However, in 20-30% of cases the results are undetermined or suspicious, and of these 6-75% are malignant, representing an important clinical challenge. Approximately 90% of all thyroid cancers (TC) present a well-known genetic event in their etiopathogenesis. Objective: Thus, the main objective was to evaluate the role of molecular testing of a panel of frequently mutated CT genes (BRAF, NRAS and pTERT), in a series of indeterminate FNABs, to investigate their possible diagnostic and prognostic role. Patients and methods: We obtained 240 cases of patients with undetermined cytological results. DNA was extracted from FNAB slides, needle wash and ThinPrep, and PCR was performed to amplify the genes of interest. After verification of the reaction products by agarose gel electrophoresis, Sanger sequencing was performed for mutational analysis of BRAF, NRAS and pTERT genes. Results: BRAF and pTERT mutations were found in 15% of the FNABs, whose histopathology confirmed malignancy. As expected, NRAS mutations (5% of FNABs) were found in both benign and malignant nodules. The mutational analysis showed high specificity (86%) and good accuracy (71%), but low sensitivity (28%). The positive predictive value (PPV) was 42% and the negative predictive value (NPV) was 77%, indicating that, in general, genetic profiling has great power to exclude malignancy when no mutations are found. Conclusion: Our results suggest that the gene panel may be a useful additional diagnostic/prognostic tool in the investigation of indeterminate FNABsand contribute to avoid unnecessary surgery due to a high negative predictive value. Introdução: Nódulos tiroidianos são eventos comuns e presentes em 37-68% da população quando exames de imagem são utilizados para diagnóstico, como US, tomografia computadorizada (TC), ressonância magnética nuclear (RM) e PET-CT. No entanto, apenas 5 a 15% correspondem a neoplasias malignas, e essa proporção varia de acordo com sexo, idade, histórico familiar, entre outros. Por esse motivo, a investigação clínica visa distinguir entre nódulos benignos e malignos, a fim de evitar cirurgias desnecessárias. O melhor teste diagnóstico é a biópsia aspirativa por agulha fina (PAAF), que fornece resultados com base na classificação citopatológica de Bethesda. No entanto, em 20 a 30% dos casos, os resultados são indeterminados ou suspeitos e desses 6 a 75% são malignos, representando um importante desafio clínico. Aproximadamente 90% de todos os cânceres de tiroide (CT) apresentam um evento genético bem conhecido em sua etiopatogenia. Objetivo: Avaliar o papel do teste molecular de um painel de genes de CT frequentemente mutados (BRAF, NRAS e pTERT), em uma série de PAAFs indeterminadas, para investigar seu possível papel diagnóstico e prognóstico. Pacientes e métodos: Foram obtidos 240 casos de pacientes com resultados citológicos indeterminados. O DNA foi extraído de lavados de agulha, líquido conservante ThinPrep e lâminas de PAAFs, e a PCR foi realizada para amplificar os genes de interesse. Após verificação dos produtos da reação por eletroforese em gel de agarose, foi realizado o sequenciamento de Sanger para análise mutacional dos genes BRAF, NRAS e pTERT. Resultados: Mutações BRAF e pTERT foram encontradas em 15% dos PAAFs, cuja histopatologia confirmou malignidade. Como esperado, mutações NRAS (5% das PAAFs) foram encontradas nos nódulos benignos e malignos. A análise genética apresentou alta especificidade (86%) e boa acurácia (71%), mas baixa sensibilidade (28%). O valor preditivo positivo (VPP) foi 42% e o valor preditivo negativo (VPN) 77%, indicando que, em geral, a pesquisa genética tem grande poder de excluir a malignidade quando não são encontradas mutações. Conclusão: Nossos resultados sugerem que o painel genético pode ser uma ferramenta adicional de diagnóstico/prognóstico útil na investigação de PAAFs indeterminados e contribuir para evitar cirurgias desnecessárias devido a um alto valor preditivo negativo.