Fusão intraespecífica de vacúolos parasitóforos de leishmania

Abstract

Protozoários do gênero Leishmania são parasitas intracelulares que alternam entre formas evolutivas: promastigota e amastigota. No interior de células hospedeiras, majoritariamente fagócitos mononucleares, o parasita se aloja em fagossomos chamados Vacúolos Parasitóforos (VPs), os quais rapidamente adquirem composição e função semelhantes as dos fagolisossomos. Vacúolos de L. (L.) amazonensis crescem em tamanho, podem abrigar um grande número de amastigotas e fundir-se com vesículas contendo colóides ou partículas de levedo morto. Apesar da fusão entre VPs de L. (L.) amazonensis ter sido detectada anteriormente por cinemicrografias, ainda não foram reportados estudos quantitativos sobre a fusão intra ou interespecífica dos VPs de Leishmania. Examinamos a cinética de fusão intraespecífica entre VPs de L. (L.) amazonensis em macrófagos murinos derivados de medula óssea, infectados com amastigotas de L. (L.) amazonensis extraídas de lesão em camundongo suscetível. Após 48 horas de desenvolvimento e maturação dos VPs receptores, os macrófagos foram reinfectados com uma segunda população de parasitas transfectados com GFP ou marcados com carboxifluoresceína diacetato succinimidil este r para a apropriada distinção entre os parasitas da primeira e da segunda infecção. A microscopia de fluorescência das culturas revelou que 2 horas após a reinfecção 3 por cento dos parasitas fluorescentes internalizados pelos macrófagos foram encontrados no interior dos VPs pre-estabelecidos contendo amastigotas não-fluorescentes. Apesar dos vacúolos reinfectados (contendo ambos parasitas marcados e não-marcados) inicialmente compreenderem apenas 2 por cento do número total de VPs , após 24 e 48 horas de reinfecção essa porcentagem atinge aproximadamente 25 por cento. Este aumento é devido provavelmente à fusão entre VPs, já que a análise revelou diminuição no número de vacúolos contendo apenas parasitas não-marcados (receptores), no número de vacúolos contendo apenas parasitas marcados (doadores), e aumento no número de vacúolos contendo ambos (reinfectados). Além disso, foi mostrado que não há prejuízo na multiplicação dos parasitas. Nosso estudo, então, documenta fusão substancial de VPs abrigando amastigotas de L. (L.) amazonensis.