Efeito dos Lactobacillus Kefiranofaciens no restauro da barreira epitelial intestinal na colite induzida por dextran sulfato de sódio em ratos

Abstract

Introdução: Dentro do grupo das doenças inflamatórias intestinais destacam-se a doença de Crohn e a retocolite ulcerativa que afetam o trato gastrointestinal, em um processo inflamatório crônico, não cúravel e recidivante. É sabido que a microbiota intestinal auxilia na homeostase da barreira epitelial, no entanto, modificações nessa composição podem afetar a integridade dessa estrutura, bem como a resposta imune inata e adaptativa. Neste contexto, o uso de probióticos pode auxiliar no equilíbrio microbiano intestinal produzindo efeitos benéficos à saúde do indivíduo, especificamente, as cepas de Lactobacillus sp que desempenham um efeito fundamental na barreira intestinal epitelial. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito dos Lactobacillus kefiranofaciens no restauro da barreira epitelial intestinal na colite experimental induzida pelo dextran sulfato de sódio (DSS) em ratos. Métodos: Quarenta ratos Wistar foram randomizados em cinco grupos: controle basal; colite induzida por DSS a 5%; controle Kefir; colite induzida por DSS a 5% tratada com Kefir; colite induzida por DSS a 5% tratada com Kefir + 5-ASA (125 mg / kg / d). A cultura lática de Kefir (Danisco Biolacta, Olstyn, Polônia) foi administrada ad libitum por seis dias. A matriz foi preparada com leite em pó integral, reconstituído a 10% com água destilada incubado a 85°C por 15 min usando um agitador mecânico. Posteriormente, 20 mg de cultura de Kefir liofilizado foram adicionados a 100 mL do leite tratado e a fermentação foi realizada a 23°C por 16 h. Atingindo pH de 4,6, a fermentação foi interrompida por resfriamento dos frascos em banho de gelo e armazenado sob refrigeração a 4°C até a utilização. Os ratos foram eutanasiados no nono dia do experimento. As amostras do cólon foram processadas e analisadas por Microscopia Eletrônica de Transmissão (TEM) utilizando TEM EX II 1200 (JEOL, Japão) acoplado a um sistema de câmera digital GATAN Orius (EUA). A avaliação histopatológica foi realizada por um patologista em microscópio óptico (OLYMPUS, BX50). Análise dos ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) foi elaborada através da amostra fecal por metódo de cromatrografia gasosa. A análise estatística foi realizada pela análise de variância unidirecional (ANOVA), seguida pelo teste de Tukey. Resultados: A execução experimental do modelo de colite foi desenvolvida com eficácia. O tratamento com Kefir reduziu os XIX sintomas clínicos da colite, evidenciada pela diminuição do desconforto abdominal e sangramento retal. Histologicamente, este grupo apresentou diminuição significativa do processo inflamatório e preservação das células caliciformes em comparação ao grupo controle colite DSS, promoveu o restauro da barreira epitelial, evidenciado pela preservação das junções oclusivas, e também diminuição de edema do retículo e aumento dos autofagossomos. Os animais com colite tratados somente com os grãos de kefir apresentaram tendência de aumento nos níveis de acetato e propionato, já os níveis de butirato foram semelhante ao grupo DSS controle. Conclusão: A administração de Lactobacillus kefiranofaciens foi eficaz no restauro da barreira epitelial intestinal, diminuindo o processo inflamatório e a atividade clínica da doença, minimizando os danos provocados pelo DSS.