Atividade antitumoral de peptídeos codificados por genes de imunoglobulina

Abstract

Antibody fragments from complementarity determining regions (CDRs) of immunoglobulins conserved genes can exert in vitro and in vivo activities, such as antiinfective, immunomodulatory and anti-tumor as has been studied in an international project including the Experimental Oncology Unit (UNONEX, UNIFESP), Brazil and the University of Parma, Italy. With the objective of testing antitumoral activity against B16F10-Nex2 murine melanoma, four peptides encoded by fragments from precursor V(D)J segments of immunoglobulin genes were called ER1, L12P, W12K and G10S, following selection based on physicochemical properties similar to those of complementarity determining regions (CDRs) of antibodies originally described with anti-fungal activity. Peptides were tested in vivo in a metastatic model with melanoma cells, in vitro in cultured tumor cells, in CoCl2 induced hypoxic tumor cells, using Western blotting, flow cytometry, cell cycle with propidium iodide and cell viability. The peptides showed antitumoral activities both in vivo and in vitro with different extents, affecting the cell cycle, cell migration, the expression of proteins associated with tumor cell aggressive behavior, such as the hypoxia-inducible factor 1-alpha” (HIF-1α), the programmed death-ligand 1 (PD-L1) and the lysyl oxidase-like 2 (LOXL2). The peptides also increased tumor cell E-cadherin e Ncadherin expression, which is important to reduce tumor cell metastasis. We conclude that the selected peptides display significant in vitro and in vivo actions against B16F10-Nex 2 melanoma cells and metastasis.

No presente trabalho foram estudados fragmentos peptídicos codificados de genes conservados das regiões precursoras de imunoglobulinas, antes do processo de recombinação dos segmentos V(D)J, e que exerceram atividades biológicas anti-infecciosas, imunomoduladoras, assim como antitumorais, in vitro e in vivo em estudos prévios que envolveram nosso laboratório, a Unidade de Oncologia Experimental (UNONEX, UNIFESP), em colaboração com a Universidade de Parma, Itália. Com o objetivo de testar a ação antitumoral em células cancerosas do modelo de melanoma murino altamente agressivo (B16F10-Nex2), foram usados quatro peptídeos denominados ER1, L12P, W12K e G10S provenientes de sequências precursoras traduzidas de genes de V(D)J, selecionados por base em propriedades físico-químicas semelhantes às de parátopos das regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de anticorpos para as quais foi verificada uma atividade antimicótica. Usando ensaios in vivo com células tumorais, culturas celulares in vitro, células hipóxicas induzidas com CoCl2, Western blotting, citometria de fluxo, ciclo celular com iodeto de propídio e testes de viabilidade celular, foi observado que os quatro peptídeos apresentaram ação antitumoral in vitro e in vivo em diferentes extensões, exercendo vários efeitos sobre as células, tais como: diminuição da velocidade do ciclo celular, diminuição da migração celular, diminuição da expressão de proteínas importantes na agressividade tumoral, como o “hypoxia-inducible factor 1-alpha” (HIF-1α), o “programmed death-ligand 1” (PDL1) e a “lysyl oxidase-like 2” (LOXL2). Além disso, os peptídeos tiveram ação no aumento de expressão das proteínas de adesão celular E-caderina e N-caderina, o que também é importante para a redução da agressividade do tumor. Assim, conclui-se que os peptídeos selecionados possuem ações significativas in vitro e in vivo contra células e metástases de melanoma B16F10-Nex2.