ABSTRACT: Information on taxonomic relationship among fish species is fundamental for an identification of wild populations. The family Characidae is a fish group widely distributed in Central and South America which must be identified, classified and preserved. Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) in this was used study to evaluate the taxonomic relationship in four tropical freshwater fish species located in Colombian territory, which belong to the family Characidae; subfamily Bryconinae: Brycon moorei and Brycon henni; and subfamily Serrasalminae: Colossoma macropomum and Piaractus brachypomus. Thirty four out of forty primers with sequences of ten nucleotides at random (RAPD) yielded 2.129 amplified DNA fragments, 428 of them were identified as specific markers that discriminated between genus and species. The fragment profiles showed that Brycon moorei got apart from the Brycon henni group, and inside this last group was possible to discriminate between samples from two different riverbasins; Magdalena and Cauca rivers. Piaractus brachypomus and Colossoma macropomum got apart from each other and distant from the subfamily Bryconinae. Furthermore, inside the Piaractus brachypomus group was possible to discriminate among individuals from the wild or the culture. The RAPD technique allowed an approach to the systematics in these species toward an appropriate identification.RESUMEN: La información sobre la relación taxonómica entre especies de peces es fundamental para una identificación de las poblaciones naturales. La familia Characidae es un grupo de peces ampliamente distribuido en Centro y Suramérica el cual debe ser identificado, clasificado y preservado. En este estudio fue utilizado el Polimorfismo de ADN Amplificado al Azar (RAPD) para evaluar la relación taxonómica en cuatro especies tropicales de peces continentales localizados en el territorio colombiano, los cuales pertenecen a la familia Characidae; subfamilia Bryconinae: Brycon moorei y Brycon henni; y subfamilia Serrasalminae: Colossoma macropomum y Piaractus brachypomus. Treinta y cuatro de cuarenta iniciadores con secuencias de diez nucleótidos al azar (RAPD) produjeron 2.129 fragmentos amplificados de ADN, de los cuales 428 fueron identificados como marcadores específicos que discriminaron entre géneros y especies. El perfil de fragmentos mostró que Brycon moorei se separó del grupo de Brycon henni, y dentro de este último grupo fue posible discriminar entre muestras de dos diferentes cuencas; ríos Magdalena y río Cauca. Piaractus brachypomus y Colossoma macropomum se separaron de forma independiente y distante de la subfamilia Bryconinae. Además, dentro del grupo de Piaractus brachypzmus fue posible discriminar entre individuos provenientes de medio natural o de cultivo. La técnica de RAPD permitió un acercamiento a la sistemática de estas especies con miras a una apropiada identificación.COL0066561