Trabajo de grado - Pregrado
Susceptibilidad bacteriana frente a cuatro soluciones germicidas
Registro en:
T 0101 890
CD3597
Autor
Pardo Hern?ndez, David
Institución
Resumen
120 P?ginas Recurso Electr?nico Las bacterias Mannheimia haemolytica, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli son microorganismos encontrados en ambientes de producci?n, alimentos, laboratorios, cl?nicas y quir?fanos, representando un riesgo constante de transmisi?n, lo cual se mitiga mediante el uso de germicidas como control. As?, la resistencia a los germicidas se evalu? para el Fenol, Formaldehido, Alcohol e Hipoclorito a las concentraciones recomendadas para la desinfecci?n. Se realiz? la incubaci?n en proporci?n 1:1 volumen/volumen de germicidas: suspensi?n bacteriana (1x109 UFC/mL) en dos tiempos de exposici?n (25min y 45min). Despu?s de la incubaci?n a temperatura ambiente y lavado por triplicado, las bacterias fueron resuspendidas en soluci?n salina est?ril, y sembradas para determinar unidades formadoras de colonia (UFC/mL). Como resultado, se evidenci? reducci?n significativa (p< 0.05) en el crecimiento de los microorganismos a los tiempos de exposici?n, frente a los germicidas evaluados, siendo el m?s efectivo hipoclorito de sodio al 5% y el alcohol 70%, mostrando crecimiento de poblaciones al conteo en placa. As?, los germicidas muestran efectividad en el control de las poblaciones bacterianas in vitro, sin embargo, se encuentra evidencia de resistencia de las cepas, por lo cual se plantea reevaluar las concentraciones utilizadas y los tiempos de exposici?n para el manejo de bacterias, principalmente aquellas que muestran antibi?tico-resistencia pues existen mecanismos (intr?nsecos y adquiridos) posiblemente implicados en esta respuesta. Este estudio establece la importancia de revisar los protocolos de desinfecci?n frente a estos pat?genos, as? como la necesidad de evaluar mecanismos de resistencia cruzada subyacentes a aislamientos cl?nicos en medicina veterinaria. ABSTRACT
Mannheimia haemolytica, Staphylococcus haemolyticus, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli are bacterial microorganisms found in farms, food, laboratories, clinics and operating rooms, therefore representing a risk of transmission, which can be mitigated through the use of germicides for their control. In that way, the resistance to the recommended concentrations as effective to disinfection of Phenol, Formaldehyde, Alcohol and hipoclorite were evaluated. The incubation in a 1:1 volume/volume ratio for the germicides: bacterial suspension (1x109 CFU/mL) in two times of exposure (25 min and 45 min) was done. After the incubation and wash period, bacteria were resuspended in sterile saline solution and cultured in Plate Count Agar to determine colony forming units (CFU/mL). As results, for all germicides was found a significant reduction (p< 0,05) in the microorganisms growth at both exposition times, , being the most effective sodium hypochlorite 5%, however the alcohol 70% showed UFC growth in the plate count. Thus, the germicides evaluated in this work, were effective in control the bacterial population evaluated in vitro, however, it was found a resistance in the isolated bacteria, whereby we propose to evaluate the utilized concentrations and the exposure time for the manipulation of the bacteria, principally those showing antibiotic resistance, this because there are mechanisms (intrinsic and extrinsic) that can be participating in this response. The present study sets the importance in check the protocols out for disinfection for these pathogens, as well as the need to evaluate cross resistance mechanisms in Veterinary Medicine isolates. INTRODUCCI?N 16
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 18
1.1. DESCRIPCI?N Y FORMULACI?N DEL PROBLEMA 18
2. METODOLOGIA 19
2.1. BACTERIAS 19
2.2. MEDICI?N DE LA CONCENTRACI?N DE BACTERIAS 19
2.3. PREPARACI?N DEL IN?CULO 20
2.4. ANTIBIOGRAMA (T?CNICA DE DIFUSI?N EN GEL DE AGAR, KIRBY ? BAUER) 21
2.5. PREPARACI?N DE LAS SUSPENSIONES CELULARES 21
2.6. RESISTENCIA A LAS SOLUCIONES GERMICIDAS 22
2.7. TASA DE REDUCCI?N BACTERIANA 23
2.8. AN?LISIS ESTAD?STICO 24
3. GERMICIDAS 24
3.1. LOS BIOCIDAS O GERMICIDAS 26
3.2. UTILIZACI?N DE LOS GERMICIDAS 29
3.3. CLASIFICACI?N DE LOS GERMICIDAS 32
3.4. SEG?N SU MECANISMO DE ACCI?N 32
3.4.1. Agentes Que Da?an La Membrana. 32
3.4.2. Agentes Que Destruyen Las Proteinas. 32
3.4.3. Modificadores De Grupos Funcionales. 32
3.4.4. Agentes Alquilantes. 32
3.5. SEG?N SU ACTIVIDAD BIOCIDA 32
3.5.1. Desinfectantes De Bajo Nivel 32
3.5.2. Desinfectantes de Nivel Intermedio 33
9
3.5.3. Desinfectante de Alto Nivel 33
3.6. SEG?N SU GRUPO QU?MICO 33
3.7. ANTIS?PTICOS 33
3.7.1. Alcoholes. 33
3.7.2. Clorhexidina. 35
3.7.3. Compuestos de Amonio Cuaternario. 35
3.7.4. Yodo y Iod?foros. 36
3.7.5. Triclosan. 36
3.7.6. Formaldehido. 36
3.7.7. Cloro. 37
3.7.8. Fen?licos. 39
3.8. USOS EN EL HOGAR 40
3.9. SUPERFICIES E IMPLEMENTOS M?DICOS 41
3.10. BIOCIDAS COMO DESINFECTANTES 42
4. RESISTENCIA BACTERIANA 45
4.1. DEFINICI?N DE RESISTENCIA 45
4.2. RESISTENCIA CRUZADA 49
4.3. MECANISMOS DE RESISTENCIA A LOS BIOCIDAS 50
4.4. MECANISMOS DE RESISTENCIA BACTERIANA INTR?NSECA A LOS BIOCIDAS 51
4.4.1 Bacterias Gram-positivas. 52
4.4.2 Bacterias Gram-negativas. 53
4.4.3 Sistemas de Excreci?n 54
4.5. MECANISMOS DE RESISTENCIA BACTERIANA ADQUIRIDA A LOS BIOCIDAS 58
4.5.1. Bacterias Gram-negativas. 60
4.5.2. Bacterias Gram positivas 60
4.5.3. Biofilms. 61
4.6. EXPRESI?N DE GENES CONFIRIENDO RESISTENCIA 66
4.6.1. Quorum sensing. 67
10
5. DESCRIPCI?N DE LAS BACTERIAS 68
5.1.1. Staphylococcus haemolyticus 68
5.1.2. Escherichia coli. 69
5.1.3. Mannheimia haemolytica (Pasteurella haemolytica) 70
5.1.4. Klebsiella pneumoniae. 70
5.1.5. Proteus mirabilis 71
6. RESULTADOS 72
6.1. DENSIDAD ?PTICA (DO) 73
6.2. CONTEO BACTERIANO EN PLACA 79
6.3. AN?LISIS DE CONTEO BACTERIANO EN log10 80
6.4. ANTIBIOGRAMA 86
7. DISCUSI?N 87
7.1. RESISTENCIA 98
8. CONCLUSI?N 101
9. RECOMENDACI?NES 102
10. REFERENCIAS 103