Trabajo de grado - Pregrado
Estudio de la metaciclog?nesis in vivo de Trypanosoma
Registro en:
T 0701 232 CD3223
CD3223
Autor
Roa Culma, Laura Alejandra
Institución
Resumen
156 P?ginas. Recurso Electr?nico La tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas, es una de las parasitosis m?s importantes en el hombre, tanto por su prevalencia como por la gravedad de su cuadro cl?nico. Esta enfermedad es causada por el par?sito Trypanosoma cruzi, el cual es transmitido por insectos hemat?fagos de la familia Reduviidae (Gulh, 2007).
El par?sito a lo largo de su ciclo de vida se desarrolla en diferentes estadios morfol?gicos, dependiendo si se encuentra en el vector o en el reservorio. El estadio infectivo en el insecto se es llamado tripomastigote metac?clico. Este se origina de un proceso llamado metaciclog?nesis, el cual se constituye en un mecanismo natural del par?sito para continuar con su ciclo en el hospedero (Garc?a & Azambuja, 1991).
De acuerdo con esto, el objetivo del presente trabajo se centr? en estudiar la metaciclog?nesis in vivo de Trypanosoma cruzi II en insectos expuestos al ayuno y de T. cruzi I y T. cruzi II bajo condiciones de realimentaci?n espec?ficas. La metaciclog?nesis del par?sito en insectos bajo condiciones de ayuno se evalu? con el linaje II (Tc II), dando continuidad a trabajos realizados por otros autores de infecciones de este vector con Tc I. Para esto se realizaron infecciones de R. colombiensis sobre ratones previamente infectados con el linaje Tc II. Luego se observ? el contenido de la ampolla rectal de los insectos calculando el n?mero total de formas y la fase de desarrollo del par?sito en un tiempo determinado. Posteriormente, se evalu? el efecto de la realimentaci?n a partir diferentes fuentes sangu?neas, de insectos infectados con Tc I y Tc II sobre la metaciclog?nesis del par?sito. Finalmente se realizaron observaciones del contenido de ampolla rectal de cada uno de los insectos, para establecer el n?mero de formas encontradas.
Los resultados obtenidos por los experimentos mostraron que en los insectos expuestos a condiciones de ayuno, no existen diferencias entre los estadios morfol?gicos observados a lo largo del tiempo evaluado. Por otro lado, en cuanto a los insectos realimentados, mostr? diferencias en la cantidad de par?sitos observados en insectos que ingirieron distintas fuentes sangu?neas, siendo mayor el n?mero de formas en vectores alimentados con sangre de rat?n, ya que ha sido reportado que la sangre de gallina lisa las formas en la parte del intestino anterior del insecto. De igual forma se encontraron diferencias en el desarrollo del total de formas de ambos linajes del par?sito evaluados en el vector. Con esto se concluy? que el linaje Tc I se desarrolla con eficiencia en el vector comparado con el linaje Tc II y por otro lado se esclarecieron algunos de los factores que influyen en la metaciclog?nesis del par?sito. ABSTRACT. American trypanosomiasis or Chagas disease is one of the most important parasitic diseases in man, both in its prevalence and the severity of the clinical picture. This disease is caused by the parasite Trypanosoma cruzi, which is transmitted by blood-sucking insects of the family Reduviidae (Gulh, 2007).
The parasite throughout its life cycle takes place in different morphological stages, depending if you are in the vector or in the reservoir. The infective stage in the insect is called metacyclic trypomastigote. This originates from a process called metacyclogenesis, which constitutes a natural mechanism of the parasite to continue its cycle in the host (Garcia & Azambuja, 1991).
Accordingly, the objective of this work focused on metacyclogenesis in vivo study of Trypanosoma cruzi II in insects exposed to fasting and T. cruzi I and T. cruzi II under specific feedback. The parasite in insects metacyclogenesis under fasting conditions was assessed with the lineage II (Tc II), continuing work by other authors of this vector infection with Tc I. To this were done infections R. colombiensis on mice previously infected with Tc II lineage. Then observed rectal ampoule contents of insects calculating the total number of forms and the stage of development of the parasite in a given time. Subsequently, the effect of feedback from different blood sources, insects infected with Tc I and Tc II on metacyclogenesis parasite. Finally, observations were made of rectal ampoule content of each insect to set the number of forms found.
The results obtained by the experiments showed that in insects exposed to fasting conditions, no differences exist between the morphological stages observed throughout the period evaluated. Moreover, as to the insects fed back, show differences in the number of parasites observed in insects that ingested different blood sources, being greater the number of ways in vectors fed mouse blood as it has been reported that blood chicken smooth forms on the insect foregut. Similarly found differences in the development of all forms of the parasite tested both lineages in the vector. With this it was concluded that the Tc I lineage develops vector efficiency compared with Tc II lineage and on the other hand were clarified some of the factors influencing metacyclogenesis parasite. ADVERTENCIA. ?La Facultad de Ciencias B?sicas de la Universidad del Tolima, el Director del trabajo y el Jurado Calificador, no son responsables de las ideas emitidas en el presente trabajo?. (Art?culo 16, acuerdo n?mero 032 de 1976 y art?culo 29, acuerdo 064 de 1991, del Consejo Acad?mico de la Universidad del Tolima, Reglamento de trabajos de grado). INTRODUCCI?N 22
1. JUSTIFICACI?N 24
2. OBJETIVOS 27
2.1 OBJETIVO GENERAL
2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
3. MARCO DE REFERENCIA 28
3.1 GENERALIDADES DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS 28
3.2 EPIDEMIOLOG?A DE LA ENFERMEDAD 29
3.3 PATOLOG?A DE LA ENFEREMEDAD 31
3.4 MODOS DE TRANSMISI?N DE LA ENFERMEDAD 32
3.4.1 Transmisi?n vectorial. 32
3.4.2 Transmisi?n transfusional. 32
3.4.3 Transmisi?n cong?nita. 33
3.4.4 Transmisi?n por v?a oral. 33
3.5 METODOS DE DIAGN?STICO DE LA ENFERMEDAD 35
3.5.1 Ex?menes parasitol?gicos directos. 35
3.5.2 Ex?menes parasitol?gicos indirectos. 36
3.5.3 Diagn?stico molecular. 37
3.6 TRATAMIENTOS DE LA ENFERMEDAD 38
3.7 Trypanosoma cruzi 39
3.7.1 Generalidades. 39
3.7.2 Taxonom?a. 40
3.7.3 Caracter?sticas morfol?gicas y biol?gicas. 40
3.7.4 Estadios morfol?gicos de T. cruzi 41
3.7.5 Ciclo biol?gico de T. cruzi. 42
3.7.6 Subpoblaciones de T. cruzi. 44
3.7.7 Antecedentes de la presencia del linaje Tc II en Colombia. 47
3.7.8 Caracterizaci?n molecular de T. cruzi. 48
3.8 VECTORES DE LA TRIPANOSOMIASIS AMERICANA 50
3.8.1 Taxonom?a. 50
3.8.2 Morfolog?a. 51
3.8.3 Biolog?a. 52
3.8.4 Vectores de importancia epidemiol?gica y su distribuci?n. 53
3.8.5 Rhodnius colombiensis (Moreno, Galv?o & Jurberg 1999). 55
3.9 INTERACCI?N PAR?SITO-VECTOR 56
3.9.1 Metaciclog?nesis. 57
3.9.1.1 Ingesta sangu?nea: promotor de la metaciclog?nesis. 59
4. MATERIALES Y M?TODOS 61
4.1 ESTABLECIMIENTO DE PARASITEMIA DE T. cruzi I Y T. cruzi II EN RATONES Mus musculus 61
4.2 MANTENIMIENTO IN VITRO DE AISLADOS DE T. cruzi I Y T. cruzi II 61
4.3 CARACTERIZACI?N MOLECULAR DE LAS CEPAS T. cruzi I Y
T. cruzi II 62
4.4 MANTENIMIENTO DE LAS COLONIAS DE INSECTOS
Rhodnius colombiensis 64
4.5 MANTENIMIENTO DE HOSPEDEROS MAM?FEROS 64
4.6 METACICLOG?NESIS IN VIVO 64
4.6.1 Infecci?n de insectos Rhodnius colombiensis bajo condiciones de
Ayuno. 64
4.6.2 Disecci?n de ampolla rectal de insectos infectados. 65
4.6.3 Infecci?n de insectos Rhodnius colombiensis bajo condiciones de
Realimentaci?n espec?fica (modificado de la metodolog?a de Kollien
y Schaub, 1998). 65
4.7 MANEJO Y DISPOSICI?N DE ANIMALES DE EXPERIMENTACI?N 66
4.8 AN?LISIS ESTAD?STICO 67
5. RESULTADOS 68
5.1 CARACTERIZACI?N MOLECULAR DE LAS CEPAS DE T. cruzi I y T. cruzi II 68
5.2 METACICLOG?NESIS DEL LINAJE Tc II EN INSECTOS EXPUESTOS AL AYUNO 69
5.2.1 An?lisis de perfiles para los estadios morfol?gicos de la cepa de TcII 34 E (Y), obtenidos de ampolla rectal de R. colombiensis durante las semanas 2, 4, 6, 8, 10 postinfecci?n. 69
5.2.2 An?lisis de perfiles para dos muestras epimastigotes y tripomastigotes de TcII obtenidos a partir de ampolla rectal de R. colombiensis durante las semanas 2, 4, 6, 8, 10 postinfecci?n. 73
5.2.3 Comparaci?n de los resultados obtenidos por Granada, (2012) de R. colombiensis infectados con el linaje Tc I y el presente estudio de R. colombiensis infectados con el linaje Tc II. 75
5.3 METACICLOG?NESIS DE LOS LINAJES Tc I Y Tc II EN INSECTOS REALIMENTADOS CON DIFERENTES FUENTES DE SANGRE 77
5.4 PRUEBA T-STUDENT PARA EL AN?LISIS DE LA FUENTE DE ALIMENTACI?N DEL INSECTO 94
6. DISCUSI?N 100
7. CONCLUSIONES 107
8. PERSPECTIVAS 108
LISTA DE REFERENCIAS 109
ANEXOS 127