| dc.contributor | García-Huidobro Toro, Juan Pablo | |
| dc.contributor | Pontificia Universidad Católica de Chile | |
| dc.creator | Coddou-Alvarez, Claudio | |
| dc.date | 2017-03-23T20:11:43Z | |
| dc.date | 2022-08-19T21:06:40Z | |
| dc.date | 2017-03-23T20:11:43Z | |
| dc.date | 2022-08-19T21:06:40Z | |
| dc.date | 2007 | |
| dc.date.accessioned | 2023-08-23T00:34:56Z | |
| dc.date.available | 2023-08-23T00:34:56Z | |
| dc.identifier | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ | |
| dc.identifier | https://hdl.handle.net/10533/178910 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8355676 | |
| dc.description | Metales traza como Zn 2y Cu2son esenciales en la función y estructura de diversas
proteínas. Más aún, estos metales son almacenados en vesículas y liberados al espacio
sináptico donde modulan la actividad de diversos canales jónicos. Los receptores
ionotrópicos P2X son activados por ATP, y se expresan en diversos tejidos. Se han
identificado siete subtipos de estos receptores, siendo P2X 4el más ampliamente
distribuido en el SNC. Una de las características de los receptores P2X es que su
actividad es modulada por metales divalentes. El receptor P2X 4resulta especialmente
atractivo en este contexto pues mientras el Zn 2potencia la actividad del receptor, el Cu 24
la inhibe. En esta tesis me propuse identificar aminoácidos involucrados en la
modulación por Zn2y Cu2en el receptor P2X4 . Para esto mutaron residuos específicos
ubicados en el ectodominio del receptor, específicamente en el fragmento Thr 123 -Thr 146 ,
ya que en esta zona se identificó previamente que His-140 es un residuo clave para la
inhibición por Cu2 . Las mutantes generadas se caracterizaron electrofisiológicamente
por expresión heteróloga en oocitos de X. laevis. La mutante C132A fue resistente a la
potenciación inducida por Zn2 , incluso este metal inhibió, de manera concentracióndependiente,
las corrientes inducidas por ATP mientras que el Cu 2las inhibió de manera
similar al receptor nativo. D138A resultó resistente a la inhibición inducida por Cu 2 ,
mientras que el Zn2potenció de manera significativamente mayor que en el receptor
nativo. Estos resultados permiten distinguir claramente la existencia de dos sitos
alostéricos para metales en el ectodominio del receptor P2X4. Uno es un sitio potenciador
al cuál se une Zn 2y del cuál es parte Cys-132 y el otro un sitio inhibidor el cuál une
Cu21y altas concentraciones de Zn2y del cuál forman parte Asp-138 e His-140. Las mutantes D129A, DI31A y T133A también presentaron diferencias menores en cuanto a
la magnitud del efecto de Zn 2y Cu2con respecto al receptor nativo. Usando receptores
concatenados P2X4 , quise estimar la contribución de las subunidades al sitio inhibitorio
con receptores que llevaban la mutación Hl 40A en una, dos o las tres subunidades que
forman en canal funcional. Los resultados sugieren que un sitio inhibitorio funcional es
suficiente para retener gran parte de la actividad inhibitoria observada en el receptor
nativo.
Además, me propuse identificar un tercer sitio alostérico sensible a Hg 2 , metal que
tienen efectos similares al Cu 2en los receptores P2X 2y P2X4, pero no ejerce su
actividad a través de los residuos extracelulares identificados para el Cu 2 . Usando
quimeras P2X412 , se determinó que el sitio sensible a Hg2está en el dominio intracelular
del receptor P2X2 a , específicamente en una secuencia de 69 amino ácidos ubicada en el
segmento C-terminal, ausente en la variante de splicing P2X2b. Estos estudios indican que
Cys-430 es responsable de la potenciación por Hg 2 , ya que C430A es resistente al efecto
del metal. Además, se observó que el peróxido de hidrógeno (H202) y otros agentes que
generan especies reactivas de oxígeno aumentan las corrientes inducidas por ATP en el
receptor P2X2 a, pero no en P2X2b ni en la mutante C430A, por lo que Cys-430 podría
constituir un sensor redox intracelular del receptor P2X 2a.
En resumen, se identificaron y caracterizaron dos sitios alóstencos extracelulares para
metales traza del receptor P2X4 y además se identificó un sensor redox intracelular en el
receptor P2X2a . Estos hallazgos sugieren la importancia de los metales traza como
moduladores alostéricos de la excitabilidad neuronal. | |
| dc.description | PFCHA-Becas | |
| dc.description | Doctor en Ciencias Biológicas Mención en Ciencias Fisiológicas | |
| dc.description | 132p. | |
| dc.description | PFCHA-Becas | |
| dc.description | TERMINADA | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | spa | |
| dc.relation | instname: Conicyt | |
| dc.relation | reponame: Repositorio Digital RI2.0 | |
| dc.relation | instname: Conicyt | |
| dc.relation | reponame: Repositorio Digital RI2.0 | |
| dc.relation | handle/10533/108040 | |
| dc.relation | info:eu-repo/grantAgreement/PFCHA-Becas/RI20 | |
| dc.relation | info:eu-repo/semantics/dataset/hdl.handle.net/10533/93488 | |
| dc.rights | Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 Chile | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | |
| dc.title | Identificación de los sitiós alostéricos para zn2+, cu2+ y especies reactivas de oxígeno en receptores purinérgicos p2x. | |
| dc.type | Tesis Doctorado | |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion | |
| dc.type | Tesis | |
| dc.coverage | Santiago | |
