| dc.description | La Poliposis Adenomatosa Familiar (P AF) es uno de los principales síndromes
hereditarios de predisposición al desarrollo de cáncer colorrectal, causada por mutaciones en
la línea germinal (heredada) en el gen supresor de tumores APC (5q22-21). Estos pacientes,
además de cáncer colorrectal, pueden desarrollar una variedad de manifestaciones
extracolónicas en diferentes tejidos y órganos que incluye los pólipos en el estómago e
intestino delgado, anomalías dentales, cáncer de tiroides y tumores desmoide, entre otros.
Entre estas manifestaciones, los tumores desmoide son los más importantes, ya que éstos
constituyen la segunda causa de muerte en estos pacientes. Los tumores desmoide se
caracterizan por la proliferación descontrolada de fibroblastos, localmente invasivos, con una
alta tasa de recurrencia y sin un tratamiento efectivo a la fecha. Aunque el crecimiento de
estos tumores puede llegar a ser muy agresivo, éstos son considerados como tumores
benignos, debido a que no son capaces de diseminar a distancia (metástasis). De esta forma,
los tumores desmoide pueden transformarse en un desafío clínico importante, debido a lo cual
una caracterización genético molecular es de alta relevancia para mejorar el conocimiento de
la o las vías genéticas involucradas en su desarrollo y para la creación de futuras
aproximaciones terapéuticas.
La etiología de los tumores desmoide en pacientes con P AF ha sido relacionada con
mutaciones en el gen APC, debido a que entre el 1 O y 19% de los pacientes P AF desarrolla
estos tumores. El conocimiento molecular involucrado en la progresión de estos tumores es
escaso; existen pocos trabajos que analicen alteraciones genéticas en genes específicos. A
nivel genómico, estos tumores han sido estudiados principalmente mediante cariotipo, los cuales han demostrado trisomías de los cromosomas 8 y 20. Tres estudios genómicos mediante
Hibridación Genómica Comparativa en cromosomas metafásicos o con sondas BACs, han
demostrado que alrededor del25-35% de los tumores presenta alteraciones en los cromosomas
lq, 7p, 9p y 20, producto de ganancias, y en los cromosomas 6, 6q, 5q, 4q y 13q, que
constituyen pérdidas.
Distinto es el caso del cáncer colorrectal, para el cual existe un amplio conocimiento
sobre las vías genéticas involucradas. Un modelo genético descrito por Fearon y Vogelstein en
1990, muestra los principales cambios genéticos que guían a la transformación del cáncer
colorrectal. Estos cambios genéticos involucran a APC (5q22-21), K-ras (12p), DCC (18q) y
P53 (17p ). Los loci APC, DCC y P53 corresponden a genes supresores de tumores, afectados
por deleciones genómicas, en tanto, que mutaciones puntuales en K-ras conllevan a una
activación constitutiva de esta proteína.
Dado que los pacientes con P AF con mutaciones en el gen APC pueden desarrollar
ambos tipos de tumores, nos propusimos comparar las alteraciones genéticas y genómicas
presentes en los tumores desmoide con aquellas descritas para los tumores colorrectales. Nos
planteamos como hipótesis que los tumores desmoide de pacientes con Poliposis
Adenomatosa Familiar, presentan diferentes alteraciones genéticas y genómicas de aquellas
descritas en el desarrollo del cáncer colorrectal. El objetivo general fue determinar
alteraciones en genes específicos descritos para la P AF y definir las alteraciones genómicas
presentes en los tumores desmoide, comparándolas con aquellas descritas en el cáncer
colorrectal.
Para cumplir con este objetivo se seleccionaron seis pacientes pertenecientes a cinco
familias con mutación germinal en el gen APC identificada, todos estos pacientes desarrollaron tumores desmoide además de la poliposis colónica (tumores colorrectales).
Desde estos seis pacientes se colectaron biopsias de los tumores desmoide, a partir de las
cuales se extrajo el DNA genómico tumoral. En primer lugar, se evaluó el mecanismo de
inactivación del alelo normal del gen APC en el tumor desmoide de cada paciente, a través de
deleción genómica o mutación somática. La deleción fue estudiada mediante el uso de cuatro
marcadores genéticos STR (short tandem repeat) aledaños al gen APC, o bien, mediante un
marcador alélico interno (mutación de la línea germinal). Este último marcador además nos
permitirá discriminar entre los alelas normal y mutado. Las mutaciones somáticas fueron
estudiadas en los exones 1-14 y fragmentos C-I del exón 15 del gen APC mediante el análisis
de SSCP (single strand conformation polymorphism). Además, en los tumores desmoide se
estudió la expresión de ~-catenina mediante inmunohistoquímica. En segundo lugar, se
evaluaron deleciones genómicas del gen p53 y locus DCC mediante el uso de marcadores STR
aledaños a estas regiones, además de mutaciones puntuales somáticas en los codones 12, 13 y
61 en el protoncogen K-ras mediante secuenciación de DNA. En tercer lugar, se evaluaron
alteraciones genómicas en los tumores desmoide mediante la técnica de hibridación genómica
comparativa en microarreglos de DNA (array-CGH).
Nuestros hallazgos sobre la inactivación somática del gen APC, deleción o mutación,
en tumores desmoide asociados a P AF demostró que dos tumores presentan pérdida del alelo
normal, dos tumores presentan pérdida del alelo mutado y finalmente en dos tumores
desconocemos el mecanismo involucrado en la inactivación de la copia normal de APC. La
pérdida de la copia normal concuerda con lo descrito por la hipótesis de del "segundo evento"
de Knudson, en tanto que la pérdida del alelo mutado constituyó un hallazgo no esperado. Esto
último no refleja la inactivación del alelo normal, lo cual sugiere la existencia de otro mecanismo que inactiva la copia normal del gen APC, que podría corresponder a un "tercer
evento" en APC, distinto a lo descrito por Knudson. El estudio de 0-catenina mediante
inmunohistoquímica sugiere una actividad anormal de la proteína APC en los seis tumores, los
cuales mostraron una expresión heterogénea entre ellos. El estudio de los genes candidatos del
modelo de Vogelstein, K-ras, DCC y P53, reveló que éstos no se encuentran mutados en los
tumores desmoide. Estos hallazgos sugieren que los genes que participan en el desarrollo de
los tumores desmoide son diferentes de aquellos involucrados en el desarrollo de los tumores
colorrectales. Por otra parte, identificamos un gran número de alteraciones cromosomales
previamente no publicados en los tumores desmoide. Dentro de estas alteraciones,
encontramos una deleción presente en el 100% de los tumores localizada en el cromosoma
2q32.1, además de ganancias en las regiones cromosómicas 3p21.31-p21.1, 6p22.2, 6p21.33,
6p21.1 , llq12.3, 14qll.2, 16p13.3, 17q25.3 y 19q13.42-q13.43 en el 83% de los tumores.
Estas regiones incluyen un total de 572 genes candidatos, a partir de los cuales se pueden
escoger genes supresores de tumores o protoncogenes que sean relevantes en el desarrollo de
los tumores desmoide.
La comparación de los perfiles genómicos obtenidos en los tumores desmoide con
aquellos descritos en la literatura para los adenomas y el cáncer colorrectal demostró
diferencias entre los tipos de alteraciones, sugiriendo que los mecanismos de progresión de
ambos tumores es diferente. El agrupamiento jerárquico de los perfiles genómicos de los
tumores desmoide reveló tres grupos que se diferencian por el número de alteraciones
cromosomales identificadas. Estos grupos correlacionan con la localización del tumor y con la
expresión de 0-catenina en el tumor. En conclusión, a pesar de que el desarrollo de los tumores desmoide en pacientes P AF
comparten el mismo gen de predisposición que el cáncer colorrectal, los tumores desmoide
presentan diferencias claras con los tumores colorrectales, indicando que los principales
mecamsmos descritos para el cáncer colorrectal no son compartidos con los tumores
desmoide. | |
