| dc.contributor | Brunet-Polanco, Juan Eduardo | |
| dc.contributor | Pontificia Universidad Católica de Valparaíso | |
| dc.creator | Sánchez-Donoso, Susana | |
| dc.date | 2017-03-27T17:23:20Z | |
| dc.date | 2022-08-18T01:09:38Z | |
| dc.date | 2017-03-27T17:23:20Z | |
| dc.date | 2022-08-18T01:09:38Z | |
| dc.date | 1997 | |
| dc.date.accessioned | 2023-08-21T21:31:12Z | |
| dc.date.available | 2023-08-21T21:31:12Z | |
| dc.identifier | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ | |
| dc.identifier | https://hdl.handle.net/10533/179600 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8284828 | |
| dc.description | ¡,a enzima Malato DcsIiidroi.cnasa Mitocondrial (le COZOI1 (le OíClFIO
(E.C. 1 1 3.37, mMDH ) es una proteína dimérica de peso molecular 68.000. Esta enzima
cataliza la interconversión entre oxaloacetato y malato utilizando NADEI como cofactor.
Los valores reportados en la literatura para la constante de disociación del equilibrio
dímero- monómero de esta enzima presentan una gran dispersión y van desde el rango
micromolar a nanomolar.
En este estudio, hemos utilizado fluorescencia en estado estacionario y resuelta en el
tiempo para examinar el efecto de la presión, del p11, de algunos desnaturantes y de la
dilución en la disociación de mM DII.
Para seguir el equilibrio hemos utilizado la enzima marcada con fluoresceína Los
conjugados de mMDII-fluoresceína retienen el lOO % de la actividad de la proteína
nativa, lo que indica que su comportamiento es un buen reflejo del comportamiento de la
enzima nativa en solución.
El valor de la polarización de fluorescencia estática obtenido para una concentración
de enzima de 2x10 M fue de 0,33 y el tiempo de correlación rotacional tiene un valor de
34 ± 2 ns, un valor consistente para el tamaño del dímero de mMDH. Tanto el valor de
polarización estática como el tiempo de correlación rotacional se mantuvo constante en
el rango de concentración de enzima entre 1x10' hasta lxlOM M, indicando que no es
posible disociar este dímero en forma espontánea en el rango de concentración estudiado a pH 8 y a 25°C. Los estudios del efecto de pH sobre el equilibrio indican que en el rango de pH de 5 a
8, la enzima se mantiene en su forma dimérica. El único efecto observado fue una
disminución en el tiempo de correlación rotacional, atribuido a una leve
electrocontricción del dímero que lo acercaría a una forma esférica, alejándolo de su
forma elipsoidal determinada por los estudios de polarización dinámica.
Los estudios de alta presión confirman la estabilidad de la forma dimérica,
entregando además evidencia del alto grado de compactación de la molécula.
El uso de desnaturantes como urea y clorhidrato de guanidina para estudiar el
equilibrio dímero-monómero condujo a resultados donde se mezcla el efecto de
disociación con el efecto desnaturante de estos gentes, y donde no es posible estudiar
estos dos procesos en forma independiente.
Así, este estudio indica que, contrariamente a lo reportado previamente por algunos
autores, mMDH es un dímero, cuyas subunidades, idénticas, están unidas por
interacciones fuertes y la estructura de estos monómeros parece ser muy sensible a
desnaturantes como urea y clorhidrato de guanidina, de modo que los procesos de
disociación y desnaturación suceden al mismo tiempo. | |
| dc.description | PFCHA-Becas | |
| dc.description | Doctor en Ciencias Mención en Química | |
| dc.description | 129p. | |
| dc.description | PFCHA-Becas | |
| dc.description | TERMINADA | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | spa | |
| dc.relation | instname: Conicyt | |
| dc.relation | reponame: Repositorio Digital RI2.0 | |
| dc.relation | instname: Conicyt | |
| dc.relation | reponame: Repositorio Digital RI2.0 | |
| dc.relation | handle/10533/108040 | |
| dc.relation | info:eu-repo/grantAgreement/PFCHA-Becas/194016 | |
| dc.relation | info:eu-repo/semantics/dataset/hdl.handle.net/10533/93488 | |
| dc.rights | Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 Chile | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | |
| dc.title | Estudio de la disociación de malato deshidrogenasa mitocondrial de corazón de porcino mediante técnicas fluorescentes. | |
| dc.type | Tesis Doctorado | |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion | |
| dc.type | Tesis | |
| dc.coverage | ValparaÍso | |
