Tesis
Protozoarios entéricos con potencial zoonótico: desarrollo de metodologías de diagnóstico molecular y estudio de mecanismos de virulencia en Entamoeba histolytica
Zoonotic enteric protozoan: development of molecular diagnostic techniques and study of virulence mechanisms of Entamoeba histolytica
Autor
López Arias, Ludmila Sol
Institución
Resumen
Las infecciones parasitarias entéricas constituyen un problema sanitario muy común entre los animales de granja y, debido al potencial zoonótico de algunos parásitos, el contacto con los especímenes infectados puede causar enfermedades en los seres humanos. En Misión Nueva Pompeya (MNP) Chaco, existen condiciones de saneamiento ambiental de riesgo para las comunidades Wichí que allí habitan. Las lagunas constituyen la principal fuente de abastecimiento de agua y, dado que son además, abrevaderos para los animales silvestres, domésticos y ganado, soportan el aflujo de excretas las cuales son arrastradas por acción eólica y pluvial. Un relevamiento epidemiológico en la región indicó que el 92% de los niños Wichís padece enteroparasitosis transmitidas por el agua. Para determinar si existe riesgo de transmisión zoonótica de protozoosis en MNP, se desarrollaron PCRs diagnósticas y una membrana de hibridización reversa en línea para la identificación de los protozoarios. Se identificaron en heces animales Entamoeba bovis, Entamoeba polecki y Balantidium coli. Estas últimas fueron también halladas en heces de niños residentes de MNP. Los cerdos presentaron mayor diversidad de parásitos. Por otra parte, Entamoeba histolytica es el agente causal de amebiasis intestinal. Estudios han demostrado que contiene elementos repetitivos en su genoma: LINEs y SINEs y los Elementos Repetitivos Específicos de Entamoeba: ERE2. Este trabajo mostró que los elementos LINE son más abundantes que ERE2 y SINE (1879, 1268 y 867, respectivamente). El 25,9% de los genes de E. histolytica están próximos a estos elementos. Las funciones moleculares de estos genes fueron establecidas por medio de la Ontología Génica. Se determinaron 7 funciones moleculares, todas con posibles contribuciones a mecanismos de patogenicidad: Unión a GTP, Actividad tipo cisteína peptidasa, Actividad oxidoreductasa, Actividad Nucleosido-trifosfatasa, Actividad ATPasa y Actividad 2-alkenal reductasa. 6 se encontraban asociadas a los elementos repetitivos específicos de Entamoeba (ERE2), 3 a LINE y 3 a SINE. El algoritmo de análisis in sillico desarrollado permitió obtener genes candidatos para validarse como genes implicados en mecanismos de patogenicidad. Mediante ensayos de silenciamiento por ARN interferente se obtuvieron trofozoítos silenciados transitorios para el gen Cisteína proteinasa. Ensayos funcionales indicaron una disminución en la eritrofagocitosis y en el daño celular. Esto demuestra que existiría una relación entre ERE2, y los diferentes estados de virulencia del parásito ya que los genes aledaños (potencialmente susceptibles a la modulación por estos ETs)codifican para proteínas con posibles contribuciones a mecanismos de patogenicidad.