The aim of this study was to evaluate the effect of fresh (YHF) and powder (YHP) egg yolk on the motility, viability, functional integrity of the plasma membrane (HOST) and pregnancy rate after insemination using fresh and chilled semen. Thirty ejaculates of five alpacas were collected by the post-copulation method during the months of January to March. Ejaculates were diluted in Tris-glucose plus glycerol to a final concentration of 5%, and the two types of egg yolk were added at a final concentration of 20%. Diluted semen was separated into aliquots and maintained at 15 °C for 8 h and 5 °C for 24 h, where 180 alpacas were inseminated. Motility, viability and sperm HOST value stored at 15 and 5 °C were not affected by the type of egg yolk. Similarly, pregnancy rates were rather similar when inseminated with fresh semen (50.0 and 46.7%), or kept at 15 °C (43.3 and 40%) or 5 °C (33.3 and 30.0%) for YHF and YHP respectively. Pregnancy rate was higher in females inseminated with fresh semen (48.4%) and lower with chilled semen (31.7%) (p<0.05). The results suggested that egg yolk powder can be satisfactorily used as substitute to fresh egg yolk in extenders in fresh and chilled alpaca semen.El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de la yema de huevo fresca (YHF) y en polvo (YHP) sobre la motilidad, viabilidad, integridad funcional de la membrana plasmática (HOST) y tasa de preñez con semen fresco y refrigerado. Se colectaron 30 eyaculados de cinco alpacas mediante el método poscópula en los meses de enero a marzo. Los eyaculados fueron diluidos en Tris-glucosa y glicerol a una concentración final de 5%, y usando los dos tipos de yema de huevo a una concentración final de 20%. El semen diluido se separó en alícuotas y se mantuvo a 15 ºC por 8 h y a 5 ºC por 24 h, y se inseminaron 180 alpacas. El tipo de yema no afectó la motilidad,  viabilidad y el valor HOST en los espermatozoides conservados a 15 y 5 ºC. De igual manera, los porcentajes de preñez no variaron cuando se inseminaron con semen fresco (50.0 y 46.7%), mantenido a 15 ºC (43.3 y 40%) o refrigerado a 5 ºC (33.3 y 30.0%) para YHF y YHP, respectivamente. La tasa de preñez fue mayor en hembras inseminadas con semen fresco (48.4%) y menor con semen refrigerado a 5 ºC (31.7%) (p<0.05). Los resultados sugieren que la yema de huevo en polvo puede utilizarse como substituto de yema de huevo fresco en los diluyentes de conservación y refrigeración de semen de alpacas.