The hypoosmotic test is widely used for determining sperm quality in several animal species. The present study aimed to compare the effect of incubation of canine sperm into two hypoosmotic solutions (0 mOsm/l - HOST-s and 150 mOsm/l - HOST) on sperm viability. Fifteen ejaculates (2nd fraction) were obtained by digital manipulation from 10dogs and the spermiograms were considered as normals. A 5 μl aliquots per ejaculate were diluted in 45 μl of each of the two hypoosmotic solutions and incubated at 37 °C for 5 and 45 min respectively. Sperm viability was assessed using eosin-nigrosin staining. Results of the hypoosmotic test were 92.1 and 90.1% of dilated spermatozoa for HOST-s and HOST respectively (p<0.05) and the sperm viability was 66.5 and 78.3% of live spermatozoa for HOST-s and HOST respectively (p<0.01). It was concluded that thelower osmolality generates lower sperm viability post-incubation.La prueba hipoosmótica ha sido utilizada ampliamente en la valoración de la calidad seminal en varias especies animales. El presente estudio tuvo la finalidad de comparar el efecto de la incubación de espermatozoides caninos en dos soluciones hipoosmóticas (0 mOsm/l - HOST-s y 150 mOsm/l - HOST) sobre la vitalidad espermática (VE). Se obtuvieron 15 eyaculados (2ª fracción) mediante manipulación digital en 10 perros, cuyos espermiogramas fueron considerados normales. De cada eyaculado se tomaron alícuotas de 5 µl para diluirlas en 45 µl de cada solución hipoosmótica, e incubarlas a 37 ºC por 5 y 45 min, respectivamente. La VE se evaluó mediante tinción eosina-nigrosina. En la prueba hipoosmótica se obtuvo 92.1 y 90.1% de espermatozoides dilatados para HOST-s y HOST, respectivamente (p<0.05) y en la prueba de VE se obtuvo 66.5 y 78.3% de espermatozoides vivos para HOST-s y HOST, respectivamente (p<0.01). Se concluye que la menor osmolaridad genera menor VE posincubación.