The detection of contaminating mycoplasma in a NS-1 myeloma celI line was studied comparing three methods The probable source of mycoplasma contamination were some batches of commercial sera Fetal Bovine Sera (FBS) mouse myeloma NS-1 cells and Vero celIs (African green monkey) were cultured on PPLO medium. The other methods involved the use of an indicator cell culture system (Vero cells) and the DNA-fluorochrome staining technique. The bacteriological procedure for the isolation of mycoplasma was successful with NS-l and Vero celIs, but not with FBS. However, mycoplasma colonies with typical "fried egg" appearance were only observed with Vero celIs. Moreover, the number of colonies isolated could be appreciated only after 18 days of growth. Vero tested, showed cytopathic effect (CPE). Initial1y, dark grasules appeared in the cytoplasm of the cells. At the 5th or 7th day, cell membranes showed small linger-like projections and vacuolization. By the 3rd or 4th week, the CPE was more pronounced. Monolayers of Vero cells were a1so grown on coverslips for 2 to 5 days and were stained with Hoechts DNA: fluorescent stain. The cells show discrete zones of fluorescence in the cytoplasm and nuclei. The: fluorescent spots were time-dependent Hoechst technique appears to be the method 01 choice, since it is more efficient, less time consuming and simpler.Se aisló y detectó una cepa de micoplasma contaminante de la línea celular NS-l. Para el aislamiento primario, se empleó Agar PPLO suplementado con suero equino o humano y extracto de levadura. Como métodos indirectos de detección se emplearon la línea celular indicadora Vera y el marcador fluorescente de DNA Hoeschst 33258. El microplasma fue aislado de NS-I, así como también de Vero. Sin embargo sólo con las células Vera fue posible obtener colonias de micoplasma con la típica apariencia de "huevo frito". Cultivos celulares de Vero, mantenidos de 2-5 días en el medio de cultivo conteniendo los sueros por probar fueron marcados con Hoechst. Las células Vero mostraron características y discretas zonas fluorescentes en el citoplasma y el núcleo. El microorganismo produjo efecto citopático sobre las células indicadoras, alcanzando su mayor desarrollo luego de la tercera o cuarta semana de cultivo. No se observó desprendimiento de la monocapa celular. El método de la marcación fluorescente de DNA parece ser el medio de elección para la detección de micopasma, debido a que resultó ser más rápido, eficiente y fácil de ejecutar.