dc.contributor | Sánchez Rodríguez, Jorge Emmanuel | |
dc.creator | Gastélum Garibaldi, Roberto | |
dc.date.accessioned | 2021-03-26T22:17:24Z | |
dc.date.accessioned | 2023-07-04T04:35:54Z | |
dc.date.available | 2021-03-26T22:17:24Z | |
dc.date.available | 2023-07-04T04:35:54Z | |
dc.date.created | 2021-03-26T22:17:24Z | |
dc.date.issued | 2018-07-12 | |
dc.identifier | https://hdl.handle.net/20.500.12104/82546 | |
dc.identifier | https://wdg.biblio.udg.mx | |
dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/7270322 | |
dc.description.abstract | Los canales CLCs son una familia de proteínas transmembrana especializadas en
transportar iones Cl─
. Los CLCs se activan en función del voltaje de membrana (??) y esta
activación se modula en función de las concentraciones de iones Cl─
([Cl─
]) y de protones ([H+
]).
Los miembros de la familia CLC son estructuralmente muy similares entre sí. Estos canales
consisten en homodímeros que contienen un poro en cada monómero. En la región del poro de
estos canales existen componentes moleculares que definen dos mecanismos de apertura: uno
de compuerta rápida o de poro (CP), y uno de compuerta lenta o común (CC). En dirección a la
región extracelular se encuentra un ácido glutámico (E) que genera el mecanismo de CP, el cual
facilita la apertura del poro debido a su protonación. En los canales CLC-0 y CLC-1 se ha
encontrado que una tirosina conservada (Y) que se encuentra posicionada en el vestíbulo interno
del poro forma parte del mecanismo que genera CC. En el canal CLC-2 este hecho aún no se ha
corroborado. En este proyecto de tesis se utilizó la técnica de fijación de voltaje de membrana en
ovocito cortado (COVC) para realizar un análisis biofísico y funcional a través de la corriente
iónica de Cl─
(???) que genera el canal de cloruro CLC-2 dependiente del voltaje expresado en
ovocitos de Xenopus laevis y dilucidar información molecular que genera el mecanismo de
apertura y cierre lento del canal CLC-2. Se planteó la hipótesis de que a tirosina conservada en
la posición 561 (Y561) del CLC-2 es un elemento estructural que forma parte de su compuerta
CC. Se estudió la función del canal mutante Y561A-CLC-2. Se encontró que el canal mutante
Y561A-CLC-2 conduce ??? tanto para ?? < 0 como para ?? > 0, a diferencia del canal silvestre
CLC-2 WT que sólo conduce para valores de ?? < 0. La cinética de apertura del canal Y561ACLC-2 se acelera con respecto a la cinética que genera el CLC-2 WT. Los experimentos de
variación de [H+
] extracelular ([H+
]e) muestran que la dependencia bifásica de la activación del
CLC-2 con esta variable se pierde para la mutante Y561A-CLC-2. La determinación del valor de
??? durante la activación del canal muestra que el sitio de protonación que está en CP (S1) se
conserva en ambos canales. Sorpresivamente, el canal mutante Y561A-CLC-2 no muestra fase
de inhibición a [H+
]e = 10-5 M. Este hecho se ha demostrado que corresponde al sitio de
protonación en la histidina H538 en el vestíbulo extracelular y que define el sitio S2 para la unión
del protón del CLC-2 y que además que la protonación de H538 afecta directamente, a través de
un mecanismo aún desconocido, a la compuerta CC. Por tales razones, los resultados obtenidos
durante el desarrollo de este proyecto de tesis indican que la tirosina conservada Y561 es un
componente molecular que genera el compuerteo lento o la CC en el canal CLC-2. | |
dc.language | spa | |
dc.publisher | Biblioteca Digital wdg.biblio | |
dc.publisher | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights | https://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp | |
dc.rights | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights | Gastélum Garibaldi, Roberto | |
dc.subject | Canales De Cloruro | |
dc.subject | Moleculas | |
dc.title | Estudio Molecular del Mecanismo que genera la Apertura Lenta del Canal de Cloruro CLC-2 Dependiente del Voltaje | |
dc.type | Tesis de Maestria | |