| dc.description.abstract | IDENTIFICACIÓN DE LA PROTEÍNA TbpB DE Actinobacillus seminis,
COMO UN CANDIDATO A INMUNÓGENO.
René Soto Martínez, Idalia Enríquez Verdugo*.
*Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal (CENID – Microbiología INIFAP). Carretera México – Toluca km 15.5, Colonia Palo Alto, C. P. 05110, México, D. F., Tel. 55703100 Ext. 45, Fax: Ext. 65, e-mail: enriquez.idalia@inifap.gob.mx
Palabras clave: Actinobacillus seminis, epididimitis, transferrina, TbpB, inmunógeno. 1 2 3 4 A B C
Introducción. Actinobacillus seminis (A.s.) es un cocobacilo Gram (-) y uno de los principales agentes etiológicos de la epididimitis ovina, la cual es una enfermedad que tiene efectos adversos sobre la fertilidad(4), el conocimiento de los factores de virulencia de A.s. a nivel mundial es muy escaso y se desconocen los componentes de la respuesta inmune celular y humoral que se encuentran involucrados(1). A.s. pertenece a la familia Pasteurellaceae, en algunos miembros de esta familia se han detectado proteínas de unión a transferrina (Tbp´s)(2). La obtención de Fe++ a partir de transferrina (Tf) ha sido identificada como un factor de virulencia(2). Las proteínas de unión a transferrina TbpA y TbpB son fuertes candidatos a inmunógenos por el papel que desempeñan en la obtención de Fe++ por los microorganismos(3).
Objetivo. Demostrar que A.s. presenta una proteína TbpB, la cual está involucrada en la obtención de Fe++ a partir de Tf y establecer su capacidad inmunogénica con sueros hiperinmunes.
Metodología. Se realizó un ensayo en células bacterianas de A.s. bajo diferentes condiciones de crecimiento para apreciar la capacidad de unión a Tf. Se obtuvierón proteínas totales de A.s. bajo las mismas condiciones de crecimiento del ensayo anteriormente descrito por sonicación y se les realizó una transferencia a membrana de nitrocelulosa detectándose con Tf-biotinilada la proteína TbpB de A.s.. Se purificó por electroelusión esta proteína y se verificó su capacidad inmunogénica con sueros hiperinmunes de ovino.
Resultados y discusión. Se determinó la presencia de adhesinas de superficie de A.s. que unen Tf-biotinilada expresándose mayormente en restricción de Fe++ y en presencia de Tf (Figura 1). Se obtuvieron proteínas totales de A.s. y se logró detectar la proteína TbpB mediante Western-blot (Figura 2). Purificamos la proteína TbpB de A.s. la cual tiene un peso molecular aproximado de 63 kDa. Por último logramos comprobar que la proteína TbpB purificada es reconocida por sueros hiperinmunes de un ovino con epididimitis.
Figura 1. Ensayo por gota a partir de células bacterianas. Carriles:
1A) A. seminis ATCC +Fe++, 2A) A. seminis ATCC –Fe++,
3A) A. seminis ATCC – Fe++ + HTf, 1B) Aislado de A. seminis +Fe++,
2B) Aislado de A. seminis -Fe++, 3B) Aislado de A. seminis -Fe++ + HTf,
2C) P. multocida ATCC -Fe++, 3C) P. multocida ATCC -Fe++ + HTf,
4A) E. coli +Fe++, 4B) E. coli -Fe++, 4C) E. coli -Fe++ + HTf.
Figura 2. Detección de proteínas de unión transferrina. Carriles:
1) Marcador de peso molecular, Proteínas totales: 2) A. seminis ATCC +Fe++, 3) A. seminis ATCC -Fe++, 4) A. seminis ATCC -Fe++ + HTf,
5) Aislado de A. seminis +Fe++, 6) Aislado de A. seminis -Fe++, 7) Aislado de A. seminis +Fe++ +HTf, 8) Marcador de peso molecular, Proteínas totales: 9) P. multocida ATCC +Fe++, 10) P. multocida ATCC -Fe++, 11) P. multocida ATCC -Fe++ +HTf, 12) E. coli +Fe++, 13) E. coli -Fe++, 14) E. coli -Fe++ +HTf.
Conclusiones y perspectivas. A.s. presenta una proteína que une transferrina TbpB de 63 kDa, la cual podría ser un fuerte candidato a inmunógeno, por ser una proteína de membrana externa y presentar características deseadas para su reconocimiento por el sistema inmune del hospedero. Posteriormente se espera probar la proteína TbpB purificada en el modelo Murino para evaluar su capacidad inmunogénica cuantitativamente y observar el efecto protectivo de esta.
Agradecimientos. Al CONACYT por el financiamiento recibido para la realización de este trabajo proyecto No G-38590-B, al Dr. Víctor Tenorio y a todo el personal del laboratorio de bacteriología del CENID-Microbiología Animal del INIFAP por su apoyo en la realización de este trabajo, a la Dra. Margarita Garrido y al M. en C. Rodrigo Martínez Zúñiga por sus revisiones y su tiempo y a la UPIBI por la oportunidad de formación brindada.
Referencias.
1. Arteaga, C. J. D., Problemática de la ovinocultura en México CONASA. 1999.
2. Gray-Owen, S. D. and Schyvers, A. B. (1996). Bacterial Transferrin and Lactoferrin receptors Trends in Microbiology. 4(5):185-191
3. Potter, A. A., Schryvers, B. A., Ogunnariwo, A. J., Hutchins, A. W., Lo Y. C. R. y Watts T. (1999). Protective Capacity of the Pasteureulla haemolytica transferring-binding proteins TbpA and TbpB in cattle. Microbial Pathogenesis 27: 197-206.
4. Van Tonder, E. M. (1979). Actinobacillus seminis infection in sheep in the Republic of South Africa. II. Incidence and geographical distribution. Onderstepoot J. Vet. Res. 46: 135-140. | |
