Determinación de la eficiencia de incorporación y especificidad de nanoparticulas biodegradables con diferentes quimiofarmacéuticos en células de cáncer de mama

Abstract

ABSTRACT: Different types of nanoparticles (np) that can serve as vehicles of drugs and reduce cytotoxicity of these, have been developed over the last decade. In addition, in order to be able to point them to a specific site in the body, they have been joined it different molecules, such as peptides and antibodies among others. Since in México, beast cancer is the most often in women, and the drugs used in treatment are highly toxic, in this work there were synthesized biodegradable nanoparticles (np-Bio) prepared from derivatives of poly ( -benzcyl-L-glutamate) are marked with a peptide and there was founded their efficiency in vitro incorporation of chemotherapy and their specificity to recognize breast cancer cells. The peptide p14ARF(1-22) was used cause it has affinity for breast cancer cells, the capacity of incorporation (CPP) and induce cell death. Synthesized of np-Bio was by nanoprecipitation and their characterization by TEM, DLS, 1HMNR, FT-IR. Nanoparticles of 50-55 nm were obtained. The functional chemical groups that were expected, were foundend by IR. The efficiency of drugs by np-Bio encapsulation was of 3.67% and 4% for methotrexate and paclitaxel respectively, determined by HPLC. In less than 15 min time is possible to detect the addition of the np-Bio in MDA-MB-231 and HaCat cells, observed by microscopy fluorescence and spectrofluorimetry. Cell viability recorded as a result of different treatments with np-Bio and drugs, indicates that conjugated systems with pARF(1-22), generally did not improve the incorporation of the np-Bio nor directed the system, as well as didn’t have cytotoxic effect per se.

RESUMEN: En la última década se han desarrollado diferentes tipos de nanopartículas (np) que puedan servir como vehículos de fármacos y así reducir la citotoxicidad de estos. Además, con la finalidad de poder dirigirlas a un sitio específico en el organismo, se les han unido moléculas como péptidos y anticuerpos entre otros. Debido a que en nuestro país el cáncer con mayor frecuencia, en las mujeres, es el de mama, y los fármacos que se utilizan en su tratamiento son altamente tóxicos, en este trabajo se sintetizaron nanopartículas biodegradables (np-Bio) preparadas a base de derivados del poli( -bencil-L-glutamato) que se marcaron con un péptido y se determinó su eficiencia in vitro de incorporación de quimioterapéuticos y especificidad para reconocer células de cáncer de mama. Se usó el péptido p14ARF (1-22) que tiene afinidad por las células de cáncer de mama, incorporarse en ellas (CPP) e inducir muerte celular. Las np-Bio fueron sintetizadas por nanoprecipitación y caracterizadas por TEM, DLS, 1HMNR, FT-IR. Se obtuvieron nanopartículas de 50-55 nm, determinado por TEM. Se encontraron los grupos funcionales esperados en su análisis molecular mediante IR. La eficiencia de encapsulación de los fármacos por las np-Bio, fue del 3.67 % y 4% para el metotrexato y paclitaxel respectivamente, determinada por HPLC. En un tiempo menor a los 15 min es posible detectar la incorporación de las np-Bio en las células MDA-MB-231 y HaCat, observado mediante microscopía de fluorescencia y espectrofluorometría. La viabilidad celular registrada como consecuencia de los diferentes tratamientos con np-Bio y los fármacos, indica que los sistemas conjugados con pARF(1-22) generalmetne no mejoraron la incorporación de las np-Bio ni dirigen el sistema, así como tampoco presentan efecto citotóxico per se.