Inducción de mieloma murino

Abstract

ABSTRACT: Multiple myeloma is an incurable cancer of plasma cells that represents 1% of all cancers worldwide and its etiopathology still not completely known. Murine myeloma models offer experimental systems for studying the mechanisms of neoplastic and developing new treatment strategies that would be impossible to conduct in humans or in cell cultures in vitro. The most common strains of laboratory mice are highly resistant to the induction of pristane oil myeloma, only BALB/c strain is susceptible to a high percentage. However, the etiopathology of plasmacytoma induced in mice has not been fully studied. So, in this work were analyzed histologically the kidney, spleen and small intestine, at three and eight months after pristane injection in order to know the histopathological changes developed in mouse to understand the etiopathology of this disease. The oil was administered intraperitoneally in BALB/c mice of both sexes ranging in age from 8-10 weeks, a second induction was carried out at 120 days after the first administration. The study animals were divided into two experimental groups: A) three months post-induction and B) Eight months post-induction, each with its respective control without inducing and of the same age. When completing the indicated time post-induction, all study groups underwent extraction of blood serum, cells from the peritoneal cavity and organs kidney, spleen and small intestine. For serum, blood collected by intracardiac puncture, clotted at room temperature and the serum was separated with centrifuge, which was frozen at -70 ° C until use in the determination of total serum protein and cellulose acetate electrophoresis . Subsequently, the mice were sacrificed by cervical dislocation and peritoneal cells were obtained by washing the peritoneal cavity with culture medium. Finally, we proceeded to gross examination of the peritoneal cavity, as well as the removal and formalin fixation of kidney, spleen and small intestine for further histological analysis. In both experimental groups, the concentration of protein in the serum was unchanged between the groups treated with oil and their respective witnesses; also staining of histological sections with congo red was negative for the presence of amyloid protein in all organs studied. In group three months post-induction, there was no looking neoplastic plasma cells in the peritoneal cavity neither histopathological changes in kidneys, spleen and small intestine. In the group eight months post-induction, there were atypical plasma cells with neoplastic characteristics in the peritoneal cavity, a result that indicates the establishment of the plasmacytoma. For its part, the organs histologically showing no significant change in their normal parenchyma, but looking cells with lymphoid features infiltrated in the organs studied, and some of them , with malignant plasma cell appearance. However, other histochemical and immunohistochemical studies are needed in order to confirm our findings. These results suggest that eight months after pristane injection, disease is in its early stages of development; also, at this time histological changes are present and for to assess significant histological changes are needed new analysis with larger times of postinduction.

RESUMEN: El mieloma múltiple es un cáncer incurable de células plasmáticas que representa 1% de todas las neoplasias a nivel mundial y su etiopatología aún no es totalmente conocida. Los modelos murinos de mieloma ofrecen sistemas experimentales para el estudio de los mecanismos neoplásicos y el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento que serían imposibles llevar a cabo en humanos o en cultivos celulares in vitro. La mayoría de las cepas de ratón comunes en el laboratorio son altamente resistentes a la inducción de mieloma con aceite pristano, sólo la cepa BALB/c es susceptible en un alto porcentaje. Sin embargo, la etiopatología del plasmacitoma inducido en el ratón no ha sido totalmente estudiada. Por lo que, en este trabajo se analizaron histológicamente el riñón, bazo e intestino delgado, a los tres y ocho meses después de la inyección de pristano con la finalidad de conocer los cambios histopatológicos desarrollados en ratón y mejorar la comprensión de la etiopatología de esta enfermedad. El aceite fue administrado intraperitonealmente en ratones BALB/c, de ambos sexos con una edad entre 8-10 semanas; una segunda inducción se llevó a cabo a los 120 días después de la primera administración. Los animales de estudio se dividieron en dos grupos experimentales: A) tres meses post-inducción y B) ocho meses post-inducción; cada uno con su respectivo testigo sin inducir y de la misma edad. Al cumplir el tiempo indicado de post-inducción, a todos los grupos de estudio se les practicó extracción de suero sanguíneo, de células de la cavidad peritoneal y de los órganos riñón, bazo e intestino. Para obtener el suero sanguíneo, la sangre recolectada por punción intracardiaca, coaguló a temperatura ambiente y por centrifugación se separó el suero, el cual se congeló a -70°C hasta su uso en la determinación de proteínas séricas totales y electroforesis en acetato de celulosa. Posteriormente, los ratones se sacrificaron por dislocación cervical y las células peritoneales fueron obtenidas mediante lavados de la cavidad peritoneal con medio de cultivo. Finalmente, se procedió al examen macroscópico de la cavidad peritoneal, así como, a la extracción y fijación en formol de los órganos riñón, bazo e intestino para su análisis histológico. En ambos grupos experimentales, la concentración de proteína presente en el suero no mostró cambios entre los grupos tratados con aceite y sus respectivos testigos; asimismo, la tinción de los cortes histológicos con rojo congo fue negativa a la presencia de proteína amiloide en todos los órganos estudiados. En el grupo de tres meses post-inducción no se observaron células plasmáticas de aspecto neoplásico en la cavidad peritoneal ni cambios histopatológicos en riñones, bazo e intestino delgado. En el grupo de ocho meses post-inducción, se observaron células plasmáticas atípicas con características neoplásicas en la cavidad peritoneal, resultado que indica el establecimiento del plasmacitoma. Por su parte, histológicamente los órganos no muestran cambios importantes en su parénquima normal; sin embargo, se observan células de aspecto linfoide distribuidas en los órganos estudiados, y algunas de ellas, con aspecto de célula plasmática neoplásica. No obstante, otros estudios histoquímicos e inmunohistoquímicos son requeridos para confirmar nuestros hallazgos. Estos resultados sugieren que a los ocho meses después de la inyección de pristano la enfermedad se encuentra en sus primeros estadios de desarrollo, asimismo, cambios histológicos están presentes en este periodo y, además, que para evaluar el efecto de la infiltración celular en los tejidos es necesario realizar análisis a mayores tiempos de postinducción.